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【教学科研参考资料】消化道及其表皮上的隐窝感测器和各种管腔含物可可调整个生物体的体内平衡。在3D圆形的井水胶体铰链上由原代人小肠表皮骨髓成形的胃隐窝可克隆血液隐窝的机能和结构特征。给予了脂质铰链零件新方法，以及使这些井水胶体固化以也就是说血液隐窝的体积和能量密度所需要的微小制品和较硬刻蚀设计方案。此外，还给予了骨髓扫描设计方案，因此，即使是超小的早期试样也可以用做算起材质。原先，将这些蛋白以增生单层的型式发芽在固化铰链上，并以骨髓/增生蛋白的型式开展培植，以使它们缩减并以隐窝状构造散布铰链颗粒。为了将这些无菌的隐窝转换成为带有基石骨髓自然生态位和腔内同化蛋白区内的基本上耦合的机能三组，整个隐窝成形了不稳定的的一维介素通量。该游戏平台拥护在整个隐窝之中成形生物化学通量，包含潮湿和同化突变，炎性衍生物，血浆和营养代谢物副产物以及病原体新产品的生物化学通量。所有微小制品和的设备零件流程预估必需8 e，原代小鼠12 e才能成形萌芽的胃隐窝。关的科学论文篇名For health single of self安renewing a intestinal epithelia over planar and shaped collagen hydrogels由哈佛大学Anne S. Allbritton系主任制作团队刊登在《Natural Protocols》上。【全彩验证】总流程由于在胃肠上皮蛋白的培植和数据分析之中存有一直身心，编者开发计划了一种支架配肠上皮蛋白单层的异型铰链，以阐释血液消化道隐窝的机能和结构特征。该游戏平台给予了小肠的微型3D病理建模，符合于已设立的数据分析精确测量和矿物质讯息得到。该试验流程将简要简介用做研发3D圆形的井水胶体铰链和的设备箱的质研发和较硬刻蚀新方法，以及在每个的设备之中做到肠上皮的清晰建模所需要的附加的原代小鼠新方法（所示1）。所示1条款的岗位步骤和日程。G，胃隐窝的培植日。上述每种小肠数学模型都有其自身的灵活性和普遍性（所示2）。一般而言，通过采用类心脏数学模型可以巧妙开展PCR增生，蛋白致癌性和生存力数据分析，因为它们很不易以规范的96孔板型式分解成。然而，类心脏难以开展铁路运输，代谢物，腺体和传染的深入研究，单层培植控制系统相结合多孔鞘由于其可吻合的音四楼和复合音而越来越适合于。矿物质的图形野外也更易在蛋白的三角形单层上督导，因为它们减轻了对多三角形扫描和jcodice_图形修葺的需求量。TIA游戏平台一般而言比类心脏控制系统或单层培植控制系统较为现代化，因此更为适于专门从事深入研究，在这些深入研究之中，只用的鲜明资料确实在其设立和督导多方面完成了更为多的心思。所示2 原代肠上皮蛋白胃培植游戏平台的非常。【流程】原代肠上皮蛋白的单层培植和传代1如果从冷冻保存的隐窝或培植蛋白开始，则将SS在37°B的水浴之中孵蛋30分钟，或一直吸热。2将1×ABC，一个15 mg锥形管和一个六孔板之中和的纤维蛋白井水胶体铰链移到到冷冻生命体安全柜之中。3从脂质铰链上取出蛋白酶，将其用做铝（1小瓶/圆孔）。平均分配4 mg的1x ABC，孵蛋5分钟。便段落此流程两次（所示3a）。所示3：单层井水胶体保持稳定原代肠上皮蛋白。4从低温内存之中放进冷冻保存的蛋白或隐窝瓶。2分钟内降温至常压。5将每个降温的小瓶4毫升SS平均分配到15毫升的锥形管之中，然后降温的蛋白原液（1毫升/酒杯）。6在600g（常压）下离心1分钟。弃去上清液，然后将沉淀物再次微粒在每个降温的小瓶4 mg的SS之中。7从将用做铺板的每个脂质铰链之中取出1x ABC，然后将4 mg SS之中的蛋白洗涤剂移到到每个孔中。8将装上蛋白的脂质铰链框取出湿润的CO2培养箱之中。9每48时长（例如，第2、4、6涵）必要一次菌种。从每个孔中取出用过的菌种，并平均分配4 mg食材的37°B SS。10当蛋白准备好通过（≥80％汇流）时，将SS和“溶解蛋白酶”在37°B的水浴中温育，或一直吸热。从4°B的贮存之中放进胶原酶供给氢氧化钠（5,000 S/mg），并将其与1×ABC，一个15 mg锥形管和在六孔板之中合成的之中和的脂质铰链独自移到到冷冻生命体安全柜之中。11从重新脂质铰链上取出蛋白酶，将蛋白让给该铰链。平均分配4 mg的1x ABC，孵蛋5分钟。便段落此流程两次（所示3a）。12为每孔平均分配100 u胶原酶原液，该氢氧化钠将离开15 mg锥形管之中。13从CO2培养箱之中放进培植的蛋白，然后从每个孔中移到1 mg用过的菌种，并将其传来15 mg锥形管之中。取出余下的菌种。14采用100–1,000 u移液器吸头，沿脂质铰链的周边地区刮擦，抵靠孔壁，以将井水胶体从板上移到。采用移液器尖端嘴唇踩铰链，并将其移到到锥形管之中（所示3b）。15采用5 mg血液移液管，将胶原酶氢氧化钠与铰链独自移液5至10次。在此流程落幕之后，应当将铰链大略水解并通过移液器吸头意志移到。16采用P1000微量移液器，将胶原酶氢氧化钠与铰链独自移液10至20次。在此流程落幕时，铰链应当相当大素质地水解，并通过移液器吸头意志移到。17在37°B下孵蛋10分钟。18在600g（常压）下离心蛋白1分钟，然后检查和沉淀物。如果脂质层保存在蛋白顶部，请重倚沉淀物并在37°B下便孵蛋1分钟。在600g（常压）下便离心1分钟。19从蛋白沉淀物之中取出上清液。20将沉淀物重悬于14 mg的1x ABC中以洗涤蛋白。21以600g离心蛋白1分钟，并从杂质之中取出上清液。22将沉淀物重悬于150 u的“溶解蛋白酶”之中。采用P200微量移液器，通过上向下滴20次来碎片蛋白沉淀物。23在37°B下孵蛋5分钟。24采用P200微量移液器，上向下滴40次，将蛋白致密碎片变成很小的碎块。25对于每个将铺地有蛋白的原先铰链，在锥形管之中投身4 mg 37°B SS。26从每个重新脂质铰链上吸收蛋白酶，并将4 mg蛋白悬液平均分配到每个孔中。27将装上蛋白的脂质铰链框取出湿润的CO2培养箱之中，每星期48时长用食材的SS必要菌种，直到下一次通过（所示3c）。1002F歧窝主实例创作（刻蚀）28南至北用甲醇和丙酮洗涤玻璃片，然后用冷却水湿润（所示4a）。所示429在设立为30 R的雷射清洁器之中对载玻片开展雷射处理过程10分钟，以减轻任何存留的颗粒有害物质并降低1002F光致抗蚀剂的附着力。30将消毒过的基材移到到直涂机上。在玻片的该中心上平均分配左右2 mg的1002F安10光致抗蚀剂。以500 hp的飞行速度以100 hp/t的飞行速度将密集的1002F安10散落在玻片上10 t，然后以300 hp/t的飞行速度以3,000 hp的飞行速度旋转轴30 t，再次鞘厚度为5 cm。31较硬面团：将载玻片在主角为95°B的冰箱之中孵蛋30分钟。32通过采用入射的红外线爆出控制系统，将整个树脂爆出于1,000 mJ/cm2的红外线下。33爆出后面团：将载玻片在95°B的冰箱或热板上孵蛋10分钟，以使光酸激起聚丙烯的降解。34较硬面团：将载玻片在主角为150°B的热板上便孵蛋30分钟，以愈合乙烯鞘（所示4a）。35从搅拌板上放回载玻片，然后蒸发至常压。36在设立为30 R的雷射清洁器之中对颗粒开展雷射处理过程10分钟，以消毒降解的1002F颗粒有害物质，并提升其他1002F层的附着力。37将基材移到到直涂机上。在玻片的该中心上平均分配左右2 mg的1002F安100光致抗蚀剂。以500 hp的飞行速度以100 hp/t的飞行速度将密集的1002F安100密集在载玻片上10 t，然后以300 hp/t的飞行速度以1,000 hp的飞行速度旋转轴30 t，以导致厚约150 cm的树脂。38软烤：将载玻片在主角为95°B的冰箱之中孵蛋2时长。39便段落两次流程37和38，以分解成总计三层。多层1002F鞘的再次直径为420安450 cm（所示4a）。40将基材移到到红外线爆出控制系统之中。用甲醇渗入的无尘室擦拭布擦去相片上方（即天花板掩盖面上）上的所有瓦砾。滑动面板并将1002F薄膜的侧面朝下。然后安放红光掩膜（所示4），使掩膜的镍朝向下，与上涂有光阻剂的载玻片的天花板爆出面保形碰触。将模块掩盖在1,200 mJ/cm2的红外线mg下。41爆出后面团：将玻片在95°B的冰箱之中孵蛋30分钟，然后在120°B的热板上孵蛋10分钟。所示5：用做胃隐窝的微加工和小鼠插入物去除。42在定轨摇躺在嘴唇研磨（左右100 hp），将其在甲醛醇类乙酸（PGMEA）显影之中孵蛋60分钟开展显影剂。43南至北用PGMEA和丙酮洗涤，然后用冷却水湿润（所示5a）。44在处理之中，砾石会扣留在微柱之中，可以通过采用PDMS将其清洗。在单次橡胶石磨盘上，将Sylgard 184硅酮高分子基料和固化剂以10：1的总重比结合。用刮刀将氢氧化钠结合，然后在密闭干燥器之中脱气，直到液体基本上清洗。在载玻片上平均分配左右3 mg的组分，然后脱气，以施用扣留在微柱间的液体。将组分在主角为95°B的冰箱之中熔化10分钟。裹PDMS以清洗存留的砾石并掉。便段落一次此PDMS软件和低层流程。45较硬奶油：将主成品在主角为150°B的热板上孵蛋30分钟。PDMS隐窝印玺创作（较硬刻蚀）46以10：1的总重比并入Sylgard 184有机硅高分子基石剂和固化剂，然后对组分脱气。47在1002F配成品上平均分配左右3 mg的PDMS组分，然后脱气以施用微柱间倒卖的液体。48将组分在主角为95°B的冰箱之中熔化30分钟。49从1002F配成品上碎裂PDMS拷贝。该脱模的PDMS带有一系列孔洞（所示5b）。50将PDMS原件摆在载玻片上，用做晶体支持物，孔洞朝上，避开载玻片。确定PDMS和载玻片间并未液体。51将流程50之中的天花板/PDMS面板在设立为150°B的热板上孵蛋2 hr，以使PDMS愈合。52雷射清洗器之中的雷射处理过程PDMS设立为30 R，年中2分钟。该流程在PDMS颗粒上导致锂层，以推动随后的乙烷表层。53在生物化学空气流通家庭用品之中，将PDMS原件移到到密闭干燥器四楼之中，并使孔洞朝上。将100 u苯甲酸（辛基）乙烷平均分配到座落腔室和中央的厚度15毫米的清洁试管之中。采用无油液压将腔室抽真空2分钟。关停腔室的主阀并接地液压的连接起来。孵蛋16时长。54很慢将生物化学空气流通家庭用品内的音四楼废气。从质子化四楼之中放进含有乙烷残渣的试管，并掉。采用无阀门将腔室抽真空2分钟，然后废气。便段落两次密闭/废气流程。55在PDMS原件上平均分配左右2 mg的Sylgard 184组分（流程46），然后脱气以施用孔洞之中倒卖的液体。将组分在主角为95°B的冰箱之中熔化10分钟。56段落流程55，直到超出所需要的再次印玺倾斜度（便开展两次到三遍）。编者辨认出，采用镊子相对于不易拇指和操纵者2到4毫米的倾斜度。57从PDMS拷贝之中删掉PDMS标识。脱模的PDMS灌入成品有与1002F主模不同的微柱感测器（所示5b）。带有孔洞的PDMS原件可用做左右10种将会的纸币研发，以后开始消失皮肤上和扭曲。58通过在150°B的热板上孵蛋30分钟来愈合PDMS印玺。59将PDMS印玺蒸发至常压，然后用剃须刀采摘至再次体积为4×4×2安4 厚度（总长×高约×较高；所示5b）。PDMS印玺的颗粒处理过程60再次准备好“ 交联红光接枝氢氧化钠”（参见“催化剂设立”）或从4°B的磁盘之中放进混种。61将PDMS印玺（≤10）安放在圆底容器之中，并填入左右50 mg 交联接枝氢氧化钠。用PTFE螺栓密闭。62将容器取出天花板试管之中开展支架，然后移到到Loctite 400 R金属和氯化萤光泛光控制系统游戏平台上。掩盖在≥240J/cm2的红外线紫外线下（4时长山洪掩盖）。63用去离子水从根本上洗涤印玺，然后在去离子水之中孵蛋投宿，以移除任何非配体连接起来的红光接枝氢氧化钠溶剂。64用75％（尺寸/尺寸）的甲醛洗涤，并贮存在装上75％（尺寸/尺寸）的甲醛的锥形管之中一直采用。65采用挤压方法从商用的12圆孔小鼠插入物之中（例如Transwell和猎鹰）暂代未及装设的鞘。用去离子水消毒要用Kimwipl或冷却水湿润（所示5c）。66从卷筒上开展纸板，安放插入物，并在插入物四周切口纸板/背衬，以使其与纸板卷或块状分开。在插入物的外外缘上用加工匕首切口，特别注意情况下切口肥皂，而不会切口背衬。采用Kimwipl和/或镊子清洗存留的肥皂，然后掉。67将上涂有肥皂的基石轮辋与食材的游憩PTFE鞘（即Biopore）碰触。朝着插入物的壁接合树脂的任何垫范围，以推动树脂，肥皂和插入物腹面间的牢固密闭。68将移到肥皂插入到塑料树脂上，使肥皂背衬在肥皂的侧面上。夫成约15毫米总长的长方形，可在每个小鼠插入物四周巧妙加载。69采用组织学打孔器，在每个塑料/胶粘剂立方体的该中心放一个厚度为3毫米的圆孔。70放回肥皂背衬，并将3 厚度圆孔与小鼠插入物的顶端和文中间。松开将颗粒压在独自。71用陶瓷匕首或钳子采摘丢从刀刃外缘抬起的所有余下材质。72将去除的插进视频移到到12孔板之中。固化井水胶体铰链的质固化73从其贮存氢氧化钠之中放进交联接枝的PDMS压模（流程64），并在采用年前湿润1时长。74采用明场显微检查和微柱。证明微柱形态之中应该并未缺点，并且并未烟雾，碎块和脂质（如果从当初的模制之中再次采用印模）。如果有烟雾或砾石，劝在75％（尺寸/尺寸）的甲醛泪水消毒纸币，湿润并再一检查和。75准备好将用做成形固化井水胶体铰链的脂质组分。在冰壶的微量离心管之中并入50μu的0.6 R EDC和50μu的0.15 R 苏格兰政府，并通过移液从根本上结合。将400μlMES挥发的脂质（5 kg/mg，酸性 5）平均分配到同一液体之中，并通过嘴唇上下吹打40次开展结合。如果组分之中成形液体，则在15,000g（常压）下离心1分钟。76在流程72的每个经过去除的小鼠插入物之中的音四楼和中央平均分配50μu脂质/EDC/苏格兰政府组分（即，在厚度3 厚度的传播站内下方）。77采用镊子，将PDMS微型管状印玺作用于并压入每个插入物内的胶体之中，微型柱状体朝下。如果在印玺和胶体间夹有任何可见的液体，可以用镊子将印玺败诉并再次安放（所示5c）。78将含有PDMS成品的小鼠插入物移到到12圆孔小鼠板中（如果未安放），然后将其取出气动熔化液体或阻力罐子。79从氧气光作用于20 MPa（200 MPa）的阻力。重启时钟5分钟，并始终保持有效率的液体储备。下降的阻力可消除降解井水胶体之中的扣留气穴，并逼使塑性脂质组分离开微柱缝隙范围。80 5分钟后，停止高气压并在培养箱之中孵蛋箱2时长。在此之后，腔室将慢慢缺氧。81在开启之后，开启腔室上的更快排气阀以吸入所有存留液体。放进含有小鼠插入物的12孔板。82向每个插入物的音四楼之中投身1 mg 1×ABC，并孵蛋≥10分钟。83用镊子不慎地从每个小鼠插入物之中度角败诉每个PDMS印玺。采用明场显微，证明每个脂质铰链之中应该存有孔洞，且并未任何歪曲（所示5c，e）。84将小鼠插入物移到到2充的去离子水液体之中，以消毒存留的交联剂铰链。在常压下孵蛋投宿。85滴液体之中的去离子水，并加进充分的75％（nd / nd）乙醇溶液以散布小鼠插入物。86将含有小鼠插入物的液体移到到冷冻生命体安全柜之中，并在75％（尺寸/尺寸）乙醇溶液之中孵蛋5分钟。87将小鼠插入物从液体移到到12圆孔小鼠板中。将插入物之中的乙醇溶液放进2充液体之中。88在每个腔室之中平均分配1 mg的1x ABC，在每个复合四楼之中平均分配2 mg的1x ABC。盖上盒子孵蛋30分钟。89从每个隔室之中吸收氢氧化钠，并将与流程88之中不同的尺寸的食材ABC平均分配到每个隔室之中。90在将蛋白传来固化的井水胶体铰链上的前一天，将VitroCol人脂质在1x ABC之中挥发至10 k/mg的pH。91从小鼠插入物的音四楼和复合四楼取出贮存氢氧化钠。将1 mg挥发的有机体脂质氢氧化钠平均分配到每个腔室之中，并将1 mg的挥发的有机体脂质平均分配到每个复合腔室之中。在常压下孵蛋投宿。胃有机体小肠隐窝的培植92用流程91降解的纤维蛋白铰链从小鼠器皿的音四楼和复合音取出人脂质氢氧化钠（即含固化的隐窝构造）。在每个腔室之中平均分配1 mg的1x ABC，在每个复合四楼之中平均分配2 mg的1x ABC。在常压下孵蛋，直到准备移到蛋白为止。93在井水或珠浴上将RR，溶解蛋白酶和10 mM T安27632供给液温育至37°B 30分钟，或一直吸热。从4°B的贮存之中放进胶原酶供给氢氧化钠（5,000 S/mg），并将其与1×ABC和一个15 mg锥形管独自移到到冷冻生命体安全柜之中。94将初始铝所需要的RR的等分坩埚平均分配到50 mg的锥形管之中（向每个腔室之中加进1 mg RR，向每个复合四楼之中加进2 mg RR，每个总3 mg小鼠插入物）。将RR之中的原液T安27632挥发至10 R的pH。95按照本条款的流程10安23，从≥80％交融的之中和纤维蛋白井水胶体铰链之中传代原代有机体小肠滤泡。96准备好一个双移液器吸头以催化蛋白多摩市：在P200微量移液器的前端安放一个2–200 u移液器吸头，然后在2–200μu移液器的前端安放一个0.1–20 u移液器吸头尖端（所示6a）。所示6：胃隐窝的成形和形态。97采用配置有双移液器吸头的P200微量移液器，通过上向下滴40次将蛋白沉淀物碎片变成很小的碎块。98将所需量的RR + T安27632（每个腔室1 mg）平均分配到碎片化的蛋白悬液之中。99从小鼠插入物之中吸收带有一定圆形的井水胶体铰链的贮存蛋白酶（流程92），从复合隔室开始，到腔腔室落幕。100智能手机蛋白重悬于RR + T安27632之中，离开每个小鼠插入物的音四楼之中（每个腔室1 mg）。将2 mg RR + T安27632（无蛋白，从流程94剩余）平均分配到每个复合隔室之中。101将板移到到37°B的湿润的CO2培养箱之中。不必要变动或妨碍框直到第2天，以使蛋白下沉到孔洞的顶端（所示6b）。102每48时长用3 mg食材的37°B RR（无T安27632）必要菌种：取出用过的菌种，并在第2、4前日1 mg RR平均分配到每个腔室之中，将2 mg RR平均分配到每个复合四楼之中（所示6b）。103（可选人）可以在缩减流程之中的任何时候（第0天）通常并染色剂蛋白的增生生命体遥相呼应证明蛋白在所有隐窝范围仅始终保持增生活性。104到第8天，小肠滤泡应当在质模制脂质铰链感测器之中100％汇流（所示6b）。从每个隔室之中取出用过的RR，并通过将0.5 mg的BF平均分配到每个腔室之中以及将1.5 mg的JYP平均分配到每个复合隔室之中，使胃隐窝耦合离开分枝/增殖性和同化同型遗传四楼。105（可选人）可通过每24时长对菌种抽样并计量复合和音四楼之中的Wnt3a，L安spondin和脚酶来确定通量成形。或者，可以采用40 真核细胞的紫外光右旋糖酐（100 k / mg）作为这些介素的比如说，并单独通过紫外光开展测。106（可选人）为减轻区室化，从而设立隐窝耦合的形容词对应，可将BF或JYP分别加进至复合音和音音，从而分别成形被基本上同化或拔/发炎蛋白散布的隐窝铰链。107（可选人）可以向前或向前（从50％（尺寸/尺寸）反应物）可调JYP之中S安WRN必需菌种的技术水平，以沿隐窝公转周期发生变化分枝/增生四楼的形状。108（可选人）在此之后可以加进其他介素，代谢物副产物，抗生素和/或病理药物，以引来所需要的真实感或次测试试验推论。109每星期24时长从每个隔室之中必要一次电介质，年中4天：取出用过的菌种，并在第9、10和11前日0.5 mg的BF平均分配到每个腔室之中，并将1.5 mg的JYP平均分配到每个复合四楼之中。110数据分析胃隐窝和/或在第12天或此后（即生物化学通量必需≥4d）对其开展生物化学通常以开展染色剂。所示6c之中图形的附加标识新方法可在编者之前的刊物之中得到。胃隐窝带有相似血液该组织的该组织技术水平自我修正技能，可以这种形式培植≥32d（所示6b，d）。引文：shown.消/10.1038/s41596安020安00419安8发行权发表声明：「井水胶体」是由专业人士Dr（后）开办的大众号，宗旨互动进修沟通改性薄膜颗粒学等应用领域的研究进展。上述均代表人编者个人观点。如有著作权或脚注违法劝连系编者修订。商业活动刊发或撰稿劝往常连系撰稿。表示感谢各位瞩目！
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【上皮细胞2】《自然环境·试验流程》三角形和异型纤维蛋白井水凝胶体以外导致自修正人肠上皮
核心提示：【教学科研参考资料】消化道及其表皮上的隐窝感测器和各种管腔含物可可调整个生物体的体内平衡。在3D圆形的井水胶体铰链上由原代人小肠表皮骨髓成形的胃隐窝可克隆血液隐窝的机能和结构特征。给予了脂质铰链零件新方法，以及使这些井水胶体固化以也就是说血
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