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投书 | 无欺责编 | 兮自从1977年，Sanger发明人第一代人类基因组计划关键技术安链终止法则以来，人类基因组计划关键技术马上视为人们得到基因脱氧核糖核酸，阐明灵魂探究，辨认出遗传性有规律的最强力方法之一。随着DNA的时代的即将来临和人们愈来愈较高的基因讯息的需求量，人类基因组计划关键技术没能更快的发展。虽然，迄今二代的PCR人类基因组计划仍是在DNA人类基因组计划和RNA小组人类基因组计划之中应用领域最广为的新技术，但其存有读完高低、低成本、依赖于测序缩减等缺点。近来，不必需测序缩减马上可以用来存取总长视频的第三代人类基因组计划关键技术安单水分子同步人类基因组计划关键技术的发展变慢，并在DNA零件，突变鉴别和DNA构造波动等多方面没能应用于。最终目标范围人类基因组计划关键技术（targeted key）则是通过可溶性人们瞩目的遗传视频，做到在降低人类基因组计划效率和人力物力效率的同时，得到最终目标遗传视频的较高厚度散布。为了相结合两者的灵活性，科学家们想法开发计划成适合于总长视频读长的最终目标范围人类基因组计划关键技术（targeted key），从而必须更多地受雇教学科研和医学。然而，迄今适合于三代人类基因组计划的最终目标范围人类基因组计划关键技术安测序缩减和CATCH安seq关键技术，都存有依赖于测序缩减，丢弃DNA去除讯息等缺陷【1,2】。2020年2同年10日，来自英国查理·纽约大学（Jefferson Craig）所大学的Brown Timp制作团队在Natural Biotechnology刊登了不断更新成果Targeted nanopore sequencing with Cas9安guided adapter ligation。本深入研究简要简介了其制作团队透过Cas9和石墨烯圆孔人类基因组计划插头连接起来（adapter ligation）开发计划成的适合于第三代石墨烯圆孔人类基因组计划的石墨烯圆孔Cas9最终目标范围人类基因组计划关键技术 (nanopore cas9安targeted key, nCATS)。Brown Timp 制作团队深入研究技术人员首先简介了石墨烯圆孔Cas9最终目标范围人类基因组计划关键技术（nCATS）可溶性最终目标遗传基因视频人类基因组计划的步骤及理论：首先通过还原性激酶（CIP）移除DNA基因前端原来的腺苷官能团，然后，通过Cas9/gRNA蛋白（RNP）在最终目标范围的两边挤压导致含腺苷官能团的原先基因前端，投身Tap蛋白和dATP从而将dATP连接起来到重新含腺苷官能团的最终目标基因视频的前端，随后连接起来上适合于石墨烯圆孔人类基因组计划的插头，下机人类基因组计划（所示1A）。为了证明此项关键技术的真实感，深入研究技术人员在DNA上配上了10个存留的12k到24k间距少于的视频作为最终目标基因表达范围。在这10个最终目标视频之中，3个视频涵盖了基因序列（TP53,KRAS和BRAF）用来次测试cCATS在检查变异多方面的真实感，5个视频涵盖突变去除启动子的遗传（KRT19,SLC12A4,GSTP1,TPM2和GPX1）用来次测试其检查基因修饰多方面的技能和2个Brown Timp制作团队原先鉴别成的涵盖6k到8k有缺陷的视频用来称赞nCATS在检查DNA构造多方面的机能。深入研究技术人员开发计划的初级石墨烯圆孔Cas9最终目标范围人类基因组计划关键技术（nCATS）之中，在最终目标范围的两边各只所选了一个sgRNA。在深入研究技术人员的配上的四个肿瘤系中，初级的nCATS透过石墨烯圆孔MinION游戏平台在次测试的视频中便必须赢得18x到864x的散布厚度。即使透过总能量小的石墨烯圆孔Flongle游戏平台，也必须超出8x到65x的散布厚度。为了必须降低nCATS的抗原降低脱靶视频引来的人类基因组计划耗费，深入研究技术人员在最终目标范围的两边各配上了多个sgRNA，开发计划成了升级版的nCATS关键技术。升级版的nCATS在所有的次测试视频之中，相结合MinION游戏平台的少于散布厚度达680x，相结合Flongle游戏平台的少于散布厚度也超出34x（所示1b）。随后，深入研究技术人员将nCATS应用领域到该组织试样的深入研究，在白血病该组织/情况下该组织试样之中也赢得93x/70x的散布厚度（所示1C）。所示1随后，深入研究技术人员次测试和建模nCATS在检查氨基酸数据类型（最近）多方面的真实感，通过非常相同人类基因组计划厚度，相同基因数据分析（最近 calling）新方法，再次透过石墨烯圆孔基因数据分析（nanopolish variant calling）相结合碱基人类基因组计划结果必须辨认出GM12878肿瘤TP53启动子的17个存留基因，而并未一个真无症状。之后，深入研究技术人员次测试nCAS相同的肿瘤系中数据分析DNA突变去除和DNA构造安视频有缺陷多方面的精确度。在本深入研究次测试的启动子之中，nCAS在这两多方面都能有优异的发挥。总之，这项深入研究开发计划的石墨烯圆孔Cas9最终目标范围人类基因组计划（nCATS）透过Cas9关键技术和第三代人类基因组计划关键技术安石墨烯圆孔人类基因组计划关键技术读长视频总长的灵活性，做到蛋白和该组织的成本低，较高DNA算起用量检查最终目标基因的基因，最终目标基因范围的去除和最终目标DNA构造的发生变化。nCATS关键技术势必在教学科研和医学检查之中起到鼓励功用。书名页面：>://shown.消/10.1038/s41587安020安0407安5引文1. Karamitros, S. Companyamp; Magiorkinis, T. Multiplexed targeted sequencing for Cambridge Nanopore MinION: w detaiincluding SQL preparation procedure. Methods Mol.Biol. 1712, 43–51 (2018).2. Gabrieli, S. la De. Selective nanopore sequencing of a BRCA1 by Cas9安assisted targeting of chromosome segments (CATCH).Nucleic Acids Res.46, e87 (2018).
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【datp】英国约翰霍普金斯所大学研究者开发计划了重新第三代基因人类基因组计划关键技术
核心提示：投书 | 无欺责编 | 兮自从1977年，Sanger发明人第一代人类基因组计划关键技术安链终止法则以来，人类基因组计划关键技术马上视为人们得到基因脱氧核糖核酸，阐明灵魂探究，辨认出遗传性有规律的最强力方法之一。随着DNA的时代的即将来临和
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