血、尿中乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、
正丁醇、异戊醇的定性分析的定量分析方法(顶空气相色谱法)
(GA/T105-1995)
1 顶空气相色谱法
1.1 适用范围:适用于低级醇类、醇性饮料中毒或中毒死亡者的血液和尿液中乙醇对血液、尿液样品中进行乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇、异戊醇的定性分析及乙醇、甲醇、正丙醇的定量分析。
1.2 原理:本法利用醇类的易挥发性,以叔丁醇为内标,用顶空气相色谱火焰离子化检测器进行检测,经与平行操作的醇类标准品比较,以保留时间定性;用内表法以醇类对内标物的峰面积比进行定量。
1.3 器材与试剂
气相色谱仪(配置火焰离子化检测器);样品瓶(7ml青霉素瓶)
硅橡胶垫;聚四氟乙烯薄膜;铝帽;密封钳;注射器(1ml );
硫酸铵;甲醇标准溶液;叔丁醇
1.4 操作步骤
1.4.1 色谱条件 气相色谱仪
a) 色谱柱:(1)5%CARBOWAX20M Carbopack(80-120目)2mm 2m玻璃柱
(2)Porapak S(80~100目)2mm 2m玻璃柱
b) 柱温: 柱(1)程序升温:始温70℃,速率5℃/min,终点170℃(5min)
柱(2)程序升温:始温100℃,速率15℃/min,终点200℃(10min)
c) 检测器:火焰离子化检测器(FID)
d) 检测室温:230℃
e) 汽化室温:
210℃
f) 载气(N2):流速20-35ml/min
1.4.2 定性分析
1.4.2.1 样品制备
取待测全血(或尿液)1ml加入样品瓶中,加100ul(2mg/ml)叔丁醇内标液,约1克硫酸铵,瓶口覆盖氟乙烯薄膜,硅橡胶垫,用密封钳加封铝帽,混匀,置60℃水浴中加热15 20min。
同时取空白全血(或尿液)两份,其中一份添加内标溶液100ul 和乙醇标准使用液20ul(20ug),按上述程序平行操作以进行空白对照和已知对照分析。
1.4.2.2进样
用1ml注射器分别吸取检材、空白对照和已知对照瓶内液面上的气体约0.5ml,注入气相色谱仪中,每个试样进样2~3次,并注入醇类标准溶液。
1.4.2.3记录与计算
分别记录各试样中内标物,醇类标准品和可疑醇峰的保留时间,填入GC定性分析结果中,计算它们的保留时间平均值,并以内标物的保留时间为1,计算醇的相对保留时间值。
1.5 定量分析
1.5.1样品制备
精密吸取待测全血(或尿液)0.5ml两份,分别加入样品瓶内,加100ul(2mg/ml)叔丁醇内标液,按1.5.2.1密封瓶口后,混匀,置60℃水浴中加热15 20min。
另取空白全血(或尿液)两份,根据检材中醇含量的多少,添加乙醇(或甲醇、正丙醇)标准使用液20ug 2mg,内标液100ul(200ug)按上述方法平行操作。
1.5.2检测 气相色谱仪
按1.5项中所述操作进行。
1.5.3记录与计算
1.5.3.1记录检材及空白添加标准品中乙醇(或甲醇、正丙醇)及内标物峰面积值,填入GC定量分析记录表中,并算出各检材乙醇(或甲醇、正丙醇)及内标物的平均峰面积值。
1.5.3.2计算相对校对因子
1.5.3.3计算检材中醇含量W(mg/100ml)
1.5.3.4计算相对相差
式中:W1,W2为两份检材平行定量测定的结果,W为两份检材平均值。
1.6 结果评价
1.6.1定性结果评价
1.6.1.1本法血、尿中乙醇、甲醇的zui低检出限为1ug/ml。正丙醇的zui低检出限为10 ug/ml。如果添加于空白检材中20ug乙醇出现相应的色谱峰,而检材未出现相应的醇类色谱峰,可以认为检材中不含醇类,阴性结果可靠。如果添加于空白检材中20ug乙醇未出现相应的色谱峰,而检材未出现醇类色谱峰,属操作有误,阴性结果不可靠,应重新检验。
1.6.1.2如果空白检材未见出醇类色谱峰,而检材有醇类色谱峰时。说明空白无干扰,阳性结果可靠,经不同的色谱条件,结果一致时一般可以认定检材中含有某种醇类物质。必要时,用GC/MS确证。
1.6.2定量分析结果评价
两份检材的相对差若不超过15%时,结果按两份检材含量的平均值计算,相对相差若超过15%,需重新进行测定。
血、尿中乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、
正丁醇、异戊醇的定性分析的定量分析方法(顶空气相色谱法)
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