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关键词：ECL；Western blotting；HRP底物；化学发光
1. 产品概述
ECL试剂，即化学发光法检测辣根过氧化物酶（HRP）的底物，是目前Western blotting检测中zui为灵敏的试剂。目前市场上普通ECL试剂在使用过程中经常出现易淬灭、高背景、不稳定以及低丰度蛋白难以检测等问题，影响zui终实验结果。
翊圣生物根据目前市场现状，集中免疫检测领域的科研人员，在严格控制鲁米诺原料的基础上，不断改良增强剂和稳定剂配方，针对不同需求开发了4类ECL试剂，包含增强型、超敏型、持久型和zui高灵敏度型产品，不仅可满足实验者对目的蛋白从低丰度到高丰度表达的检测要求，同时可在不影响实验的条件下，提高发光强度，使您获得的图像更加清晰。
的灵敏度 皮克至低飞克级的抗原检测
更高的信噪比 发光底物，降低背景
更利节省抗体 优化底物系统，更高抗体结合力
优异的性价比 更高的性能，更低的价格
的稳定性 新型氧化剂，常温下稳定保存1年
2. 产品原理
ECL试剂检测的核心原理为氧化反应发光：鲁米诺（lumino）作为发光底物的主要成分，在碱性条件下，通过辣根过氧化酶（HRP）催化，被H2O2氧化生成3-氨基邻苯二酸的激发态中间体，当其回到基态时发出光子，zui大发射波长为425 nm，光子信号可通过X射线胶片或CCD成像仪被捕获。
3. 产品选择
翊圣目前拥有的4种ECL产品，各具特色，能够完全满足用户的免疫印迹应用需求。
那么，您的实验应该选择哪一种产品呢？
表1 ECL试剂选择指南
Yeasen
Enhanced ECL
增强型
Super ECL
超敏型
SuperDura
持久型
MaxiSignal
zui高灵敏度型
适用样本
靶点丰度较高，常规蛋白样本
靶点丰度低，样本有限
靶点丰度较低，样本有限
靶点丰度极低，样品珍贵
检测灵敏度
中等皮克级
低皮克级
中等飞克级
低飞克级
信号持续时间
2 h
12 h
24 h
8 h
适用检测系统
所有试剂均适用X射线胶片，CCD成像仪
一抗稀释浓度
1:1000-1:4000
1:1000-1:10,000
1:1000-1:50,000
1:5000-1:100,000
二抗稀释浓度
1:1000-1:4000
1:2000-1:10,000
1:50,000-1:250,000
1:100,000-1:500,000
推荐用膜
NC膜
NC膜或PVDF膜
NC膜或PVDF膜
NC膜或PVDF膜
存储稳定性
室温1年
室温1年
室温1年
4℃ 1年，室温半年
优势
同一级别灵敏度中信号zui强
性价比zui高，适用于多数WB实验
zui长信号持续时间，极其适用于多次曝光
灵敏度，极其适用于痕量蛋白检测
【注】：推荐抗体稀释浓度为抗体储液浓度为1 mg/mL时的稀释浓度。
4. 产品应用
Yeasen ECL试剂对比其他品牌同级别产品具有更佳的使用效果。
图1 Yeasen ECL超敏型底物Super与其他品牌同级别底物Pico检测效果比对
图2 Yeasen ECLzui高灵敏度型底物MaxiSignal与其他品牌同级别底物West Femto检测效果比对
图3 Yeasen ECL持久型底物SuperDura与其他品牌同级别底物West Dura检测效果比对
5. 价格优势
Yeasen致力于为您提供性价比zui高的产品。
图4 Yeasen ECL产品与其他品牌同级别产品价格比对
6. 常见问题
遇到的问题
原因分析
推荐解决方法
胶片出现反影
反应系统中HRP量过多
稀释HRP标记物
胶片出现棕色或黄色条带
荧光猝灭
操作时间过长，膜逐渐干掉
避免膜干掉
保鲜膜、显影液或定影液污染
养成良好的实验习惯
反应系统中HRP量过少
增加HRP标记物
胶片无条带显现或者信号较弱
转膜的效率低
提高转膜效率，用预染Marker判断。
抗原、抗体量少或不匹配
增加抗原/抗体量或选择合适抗原/抗体
X光胶片有问题
曝光后X光谱全黑（而非透明色），则表明胶片已完全曝光，使用新的X光片
显影/定影液有问题
可预先曝光一张胶片进行判断，如有问题当换用新的显影/定影液
反应系统中HRP量过多
稀释HRP标记物
高背景
一抗二抗浓度太高
降低抗体浓度，延长封闭时间
抗体未清洗干净
增加洗膜次数
封闭不完全
优化封闭条件
使用错误的封闭剂
使用其他的封闭剂
过度曝光
降低曝光时间
抗体特异性差
更换抗体
反应系统中HRP量过多
稀释HRP标记物
条带有空斑
抗原以及二抗的浓度过高
稀释样品重新跑胶，也可将混合好的显色液冰浴后，加到膜上即刻快速显色。
带型不规则
转膜有气泡或甲醇（对于PVDF膜）水化不均匀
优化转膜条件。
胶片出现斑点
HRP标记物聚集体
0.2 m膜过滤HRP标记物
非特异性条带
反应系统中HRP量过多
稀释HRP标记物
SDS引起蛋白非特异性结合
实验流程中不使用SDS
抗体特异性差
更换抗体
封闭不足
增加封闭时间或使用其他封闭剂
7. 订购信息
产品名称
货号
规格
价格
Super ECL Detection Reagent
化学发光超敏显色试剂盒
36208ES60
100 mL
329.00
36208ES76
500 mL
1289.00
36208ES80
1000 mL
2349.00
Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit
增强型ECL化学发光检测试剂盒
36222ES60
100 mL
259.00
36222ES76
500 mL
1089.00
36222ES80
1000 mL
1989.00
SuperSignal SuperDura Extended Duration Substrate
持久性化学发光底物
36223ES10
10 mL
267.00
36223ES60
100 mL
1557.00
36223ES70
200 mL
2857.00
36223ES76
500 mL
5257.00
SuperSignal MaxiSignal Maximum Sensitivity Substrate
zui高灵敏度化学发光底物
36224ES10
10 mL
287.00
36224ES60
100 mL
1757.00
36224ES70
200 mL
3257.00
36224ES76
500 mL
5857.00
8. 相关产品推荐
产品名称
货号
规格
价格
X射线摄影暗盒（小号）
36243ES35
5 7英寸
129.00
X射线摄影暗盒（中号）
36243ES58
8 10英寸
169.00
X光片
36209ES01
1盒(100片)
227.00
Fixing Powder 定影粉
36210ES01
包
20.00
Developing Powder 显影粉
36211ES01
包
20.00
Primary Secondary Antibody Diluent for WB
WB专用一抗二抗稀释液
36206ES60
100 mL
147.00
36206ES76
500 mL
538.00
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