小鼠多巴胺D1受体（D1R）ELISA试剂盒操作步骤_91化工仪器网

上海琛艺实业有限公司经过数年的努力发展已迅速成为集产品研发、生产、经营为一体的专业化生物工程公司。公司酶科品牌ELISA试剂盒研发的种属涵盖：人，大鼠，小鼠，猪，牛，羊，兔，植物，农残类，鱼类等。具有完善的实验技术开发平台，成熟的抗原、抗体研发系统，熟练掌握各种酶联技术，结合公司的研发团队，可以有效的保证公司产品强的稳定性和高的准确性，同时又具有竞争力的价格。公司目前主要提供生化试剂、分子生物学试剂及试剂盒，各种抗体及免疫学试剂盒、实验耗材等多门类上万种产品，产品涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学的各个领域。同时需要待测服务可以随时联系销售陈静。。。。。。

名称: 小鼠多巴胺D1受体(D1R)ELISA试剂盒操作步骤

英文名称:human IgM(RhV-IgM)ELISA kit 

规格: 96T/48T

品牌:酶科

种属:大鼠ELISA试剂盒

检测波长:450 nm

所需样本体积: 50-100ul

 适用范围:仅供科研

保存及有效期:2-8℃，六个月

 检测目的:用于测定血清，血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。

上海琛艺供应的种属有：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、猪犬、牛羊、鸡鸭、植物ELISA试剂盒等

1.试剂盒用途

本试剂盒用于体外定量检测待测样品中重组胰蛋白酶含量。本试剂盒仅供研究和工业生产使用。

2.试剂盒基本参数

灵敏度： 1 ng/ml

检测范围：0.078 - 40 ng/ml

特异性：可检测重组胰蛋白酶，与其它重组大肠菌表达系统相关蛋白无明显交叉反应。

重复性：板内，板间变异系数均 10%。

工作时间：熟练实验人员可在 2.5 小时内完成一次测定。

有效期：6 个月

3.小鼠多巴胺D1受体(D1R)ELISA试剂盒操作步骤-elisa试剂盒组成及保存

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1份

1份

封板膜

2片（48）

2片（96）

密封袋

1个

1个

酶标包被板

1 48

1 96

标准品

0.5ml 1瓶

0.5ml 1瓶

2-8℃保存

标准品稀释液

1.5ml 1瓶

1.5ml 1瓶

2-8℃保存

酶标试剂

3 ml 1瓶

6ml 1瓶

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml 1瓶

6ml 1瓶

2-8℃保存

显色剂A液

3 ml 1瓶

6ml 1瓶

2-8℃保存

显色剂B液

3 ml 1瓶

6ml 1瓶

2-8℃保存

终止液

3 ml 1瓶

6ml 1瓶

2-8℃保存

浓缩洗涤液

（20ml 20倍） 1瓶

（20ml 30倍） 1瓶

2-8℃保存

注意事项

①储存：试剂盒中各种试剂请按说明书提示合理存放。储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶需旋紧以防止蒸发和微生物污染，否则可能会出现错误结果。

②酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用板条应拆下后放入备用自封袋，按推荐温度存放。

③加样：加样和加同一试剂时，第一孔与最后孔之间加样时间间隔过大将导致不同的 预温育 时间，从而明显的影响到测量值的准确性及重复性，每次的加样时间zui好控制在 10 分钟之内，推荐设置复孔。

④温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜，洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态。严格遵守给定的温育时间和温度。

⑤洗板：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸或干布上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。读数前要清除酶标板底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。

⑥试剂配制：试剂盒在运输过程中会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用 1000 转/分离心一分钟，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前请用移液器小心吹打 4-5 次使溶液混匀。所有试剂请按说明书指示请精确配制。

⑦显色时间的控制：加入底物后，请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔五分钟），如梯度已经很明显，请提前加终止液终止反应，以避免颜色过深，影响酶标仪读数。

⑧底物：请避光保存底物。在储存和温育时，避免强光直接照射。

⑨混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，zui好使用微量振荡器，使用最低频率，如无微量振荡器，可以在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。

提示：不同批号的试剂盒组分不能混用（洗涤液和终止液除外）。

⑩关于样品回收率

1）本试剂盒以测定重组猪胰蛋白酶的抗原性而非活力来推测残留量，因此试剂盒中标准品采用胰蛋白酶的消光系数（E1%1cm=13.6D, 即当 A280nm=1.36 时，胰蛋白酶浓度为 1mg/ml）来计算其蛋白含量，以最大限度保持质控的精确和稳定性。

2）不同计量方法以及产品纯度的差别可以导致不同来源、不同批次产品中胰蛋白酶的蛋白含量不完全一致，也会造成回收率的差异。

3）为避免上述因素影响，建议将用作回收率测试的样品采用分光光度法（A280nm）估算蛋白含量，再稀释至适合的浓度用于回收率测试，尽量减少回收率的误差。

11.问题分析

若实验结果有问题，请及时对显色结果拍照，并妥善保存未使用板条及试剂，然后联系技术支持。也可参考以下信息以找出原因。

 ELISA试剂盒实验因其灵敏度较高、特异性较好而广泛应用于临床上，但操作中的各环节对检测效果影响较大，稍不注意，就有可能导致显色不全、花板。

问题主要集中在这几个方面：选材、加样、孵育、洗板、显色、终止、读板。问题及解决方案具体解析如下：

选材

选择质量优良的检测试剂，操作前将试剂在室温下平衡 30-60 分钟。

加样

出现问题可能原因

1. 血清或血浆标本分离不好即进行加样。

2. 手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长（特别是室内温度较高时）。

3. 加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。

解决方案

1. 标本为血清：zui好将血液先自然存放 1-2 小时后，再用 3000 rmp 离心 15 分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合 5-10 次，放置一段时间后，3000 rpm 离心 15 分钟；若在几天内检测，可放在 2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于 -20℃的低温冰箱内。

2. 加样后及时放入孵箱。

3. 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

4. 如果采用 AT 或其他全自动加样，zui好选择 FAME 或其他后处理仪器加酶试剂。

5. 标本较多时，请分批操作。

孵育

出现问题可能原因

1. 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底。

2. 孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。

解决方案

1. 贴封片或加盖；

2. 按说明步骤严格控制操作时间。

洗板

出现问题可能原因

1. 采用手工洗板，孔与孔之间液体交叉。

2. 采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。

3. 反应板过多造成洗板等待时间长。

解决方案

1. 保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后zui好在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干。

2. 合理安排，或多用几台洗板机。

显色

出现问题可能原因

1. 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂。

2. 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。

解决方案

1. 显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的 TMB 显色剂不用。

2. 加样时保持显色剂不外流。

3. A、B 液应避免接触金属器械。

终止

出现问题可能原因

加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。

解决方案

加终止液时应避免产生气泡。

读板

出现问题可能原因

读板时板底不清洁。

解决方案

应保证酶标板清洁。