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广州辉骏生物科技有限公司，成立于2008年，位于广州市科学城，是一家由在生物医药领域具有资深科研资历人才组建的创新型科技企业，致力于为生物医药企业、高校、科研机构、医院及个人提供高品质的技术服务。通过近十年的发展，公司拥有完善的分子生物，细胞生物，蛋白免疫，质谱分析平台，尤其擅长于蛋白质组学与代谢组学，蛋白-蛋白，蛋白-核酸及核酸-核酸相互作用的筛选和验证，及以此为基础的整体课题服务。公司提供的实验数据已在40余篇SCI文章中发表，其中蛋白质组学权威期刊10余篇。
辉骏生物通过8年多精益求精的优质服务，我们已经与中山大学、浙江大学、武汉大学、上海海洋大学、西南大学、厦门大学、广州肿瘤医院、广州医科大学附属第五医院、华南植物研究所等全国100多家大中型科研院所建立广泛密切的项目合作，不断为他们提供优质的各类实验科研技术服务。
辉骏生物以扎实的科学为基础， 以引领性的技术为支撑，以开创性的精神为动力，为您提供整体实验解决方案！
辉骏生物慢病毒感染预实验：
慢病毒颗粒对不同细胞系的亲嗜性不一，原代细胞或者难感染的细胞通常需要较高的MOI，因此建议首先用慢病毒对靶细胞进行预感染，设定不同的MOI梯度(1、10、100等)，以评估目的细胞的MOI。
实验准备：
一块96孔板，最大量程为10 L和100 L的移液枪各一支，小、中枪头各一盒，1.5mL EP管若干个，polybrene、FItransfer和完全培养基。
A. 贴壁细胞的感染：
(1)培养细胞使其处于良好的生长状态；在实验前一天，将0.3 104~1.0 104个细胞接种至96孔板内，每孔100 L培养基。
(2)待细胞汇合度为20%~50%之间时，可以使用慢病毒进行感染。
(3)预实验可设置3组，分别为：完全培养基组、完全培养基+polybrene组、FItransfer组；polybrene的使用量为 5-10 g/mL之间，FItransfer为辉骏生物开发的优化过的助感染培养基，可直接当作感染完全培养基，无需额外添加其他助感染试剂，具有增强感染效率的作用；每组设置3个不同的MOI值，以寻找慢病毒感染的最适条件。
(4)病毒稀释：实验前准备2个1.5 mL的无菌EP管，将冰浴解冻的1 108的病毒液分别稀释为10倍、100倍，具体操作步骤为：取10 L 1 108 TU/mL的病毒液加入90 L完全培养基中，则此时病毒液的滴度为1 107 TU/mL，病毒量为106TU；再从此溶液中吸取10 L病毒液加入90 L完全培养基中，此时病毒液的滴度为1 106 TU/mL，病毒量为105TU。吸取病毒液的过程中尽量避免产生泡沫。
(5)polybrene稀释：polybrene的使用量为每孔5 g/mL，可预先加入完全培养基中。
(6)感染前，小心吸去培养基，每孔分别加入90 L对应的完全培养基或FItransfer；从三管不同滴度（1 108TU/mL、1 107TU/mL、1 106TU/mL）的病毒液中分别吸取10 L加入对应的孔中，即加入的病毒量分别为1 106 TU、1 105TU、1 104TU；每个孔内液体的总体积为100 L，细胞的数目大约为1 104个，因此每组中3孔的MOI值分别为100、10、1。
(7)将培养基和病毒等试剂轻轻地充分混匀,之后放入培养箱中培养。
(8)感染8~16小时后观察细胞状态，弃去感染培养基，并加入100 L新鲜培养基。
(9)慢病毒感染3~4天后观察荧光；如果细胞生长比较缓慢，可以适当延长观察时间，如感染的慢病毒带有抗性筛选元件,则可以开始换液加药筛选。
辉骏生物悬浮细胞的感染：
(1)培养细胞使其处于良好的生长状态；实验第一天，离心收集细胞，并用新鲜的完全培养基重悬细胞，将0.5 103~1 103个细胞接种至96孔板内，每孔90 L培养基； 次日按不同MOI值添加病毒液及助感染试剂和培养基。其余操作同贴壁细胞的感染步骤。
(2)如果该细胞株不易受慢病毒感染，可以使用离心孵化的方法。即在细胞培养板上加入病毒感染液后,以2500rpm(1000-1500g)在32℃或者室温下离心90min。
辉骏生物慢病毒感染正式实验：
按照换算原则，我们需要保持宿主细胞的MOI值不变，因此使用的病毒数目需要根据细胞数目的变化而做相应调整。也就是说，预实验所用的是96孔板，每孔的底面积为0.3 cm ，需要的培养基总体积为100 L，假设宿主细胞的MOI值为10（每孔细胞数量为1 104个），加入的病毒量应为1 108 TU/mL的病毒1 L；正式实验中，如果我们采用的是6孔板，每孔的底面积为10 cm ，需要的培养基总体积通常为1mL，则加入的的病毒量为1 108 TU/mL的病毒20 L。
另外，如果正式实验的培养皿规格与预实验的不同，则可以按照换算好的比例先小范围感染一次，进一步确定感染时的最适慢病毒用量和细胞密度。
更多慢病毒实验，请咨询辉骏生物
广州辉骏生物科技有限公司（简称 辉骏生物 ）成立于2008年，位于广州市科学城，是一家由在生物医药领域具有资深科研资历人才组建的创新型科技企业，致力于为生物医药企业、高校、科研机构、医院及个人提供高品质的技术服务。通过近十年的发展，公司拥有完善的分子生物，细胞生物，蛋白免疫，质谱分析平台，尤其擅长于蛋白质组学与代谢组学，蛋白-蛋白，蛋白-核酸及核酸-核酸相互作用的筛选和验证，及以此为基础的整体课题服务。公司提供的实验数据已在50余篇SCI文章中发表，其中蛋白质组学权威期刊10余篇。
