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人脑钠肽(BNP)ELISA试剂盒
(用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)
一、原理：
本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 BNP 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 BNP与单抗结合，加入生物素化的抗人BNP，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，BNP浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中BNP浓度。
二、试剂盒组成（2-8℃保存）：
酶标板（Coated Wells）
96孔
酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate）
12ml
10 标本稀释液（Sample Buffer）
12ml
20 浓缩洗涤液（Wash Buffer）
50ml
标准品（Standards）：2ng/ml
1瓶
底物工作液（TMB Solution）
12ml
抗体工作液（Biotinylated Antibody）
6ml
终止液（Stop Solution）
12ml
三、准备试剂与收集血样：
10 标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反复冻融。标准品液配制：取8个1.5ml离心管，管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在管中加入2ng/ml的标准品溶液100ul置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）四、检测程序：
加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板置振荡器（400-500rpm）室温（18-25℃）120分钟。洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。每孔加入蒸馏水和抗体工作液各50ul(空白除外)。将反应板充分混匀后置37℃20分钟。洗板：同前。每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃10分钟。洗板：同前。每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应15分钟。每孔加入100ul终止液混匀。30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。五、结果计算与判断：
所有OD值建议减除空白值后再行计算。如空白OD低于0.1，也可以直接计算。以标准品200、100、50、25、12.5、6.25、3.12、0 pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，使用软件作图，画出标准曲线。根据样品OD值计算出相应BNP含量即可。软件可以向本公司邮件索取。六、试剂盒性能：
1灵敏度：小的BNP 检测浓度小于1pg/ml。
2.特异性：可同时检测重组或天然的人 BNP。不与其它细胞因子有交叉反应。
3.重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
七、注意事项：
1.以上标准孔及待测的样品均建议做复孔，每次测定同时做标准曲线。
2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致度误差及OD值错误地升高。
3.检测时所有试剂都要恢复到室温。板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。
4.试剂盒使用超敏TMB溶液，若显色过深会出现絮状物，属正常现象，不影响结果判读。
5.说明书中试剂盒组成为96T的量，48T的量应减半！
6. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。仅用于科研，不能用于临床诊断！
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