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1、 挑取第 2 代培养物中典型菌落，接种于麦芽浸膏营养肉汤培养基中，置 30℃ 1℃ 恒温培养箱中培养 42h～48h，即为第 3 代培养物。
2、 用 10.0mL 吸管吸取 5.0mL～10.0mL 第 3 代培养物，接种罗氏瓶，并摇动使菌液布满 MEA 培养基表面，将多余肉汤培养物液体吸出，置 30℃ 1℃恒温培养箱中培养 42h～48h。
3、 向罗氏瓶培养物中加入 5.0mL～10.0mL 0.05%（V/V）吐温 80 生理盐水溶液，刮洗黑曲霉菌分生孢子于溶液中，将孢子悬液移入装有玻璃珠的三角瓶中，轻轻振摇 1min ，过滤除去菌丝后，显微镜下（400 倍）观察是否仍有菌丝存在，若有可经 5000 r/min～6000 r/min离心 20min。再次在显微镜下（400 倍）观察，必要时重复上述步骤。
4、 黑曲霉菌分生孢子悬液冷藏保存不超过 2d，使用前，混合均匀，在显微镜下（400 倍）观察是否有孢子出芽，若有则不得使用。
5、 将制成的菌悬液，进行活菌培养计数，按其结果用稀释液稀释至所需浓度，悬液定量杀灭试验时，菌悬液浓度为1 107CFU/mL～5 107CFU/mL。
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