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在人维生素D3(VD3)检测试剂盒中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下倒置混和，不要在混匀器上强烈振荡。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清天然凝固、血块收缩后即可取得。也可在板孔中加入稀释液，再在其加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。可用作人维生素D3(VD3)检测试剂盒测定的标本十分广泛，体液(如血清 )、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体 或抗原成份，人维生素D3(VD3)检测试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保留。
已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂)；(2)酶标记的抗原或抗体(结合物)；
(3)酶的底物；
(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)，参考标准品和控制血清(定量测定中)；
(5)结合物及标本的稀释液；
(6)洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水；
(7)酶反应终止液，常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的zui终体积而异，在板式ELISA中一般采用2mol/L。
假如您的人维生素D3(VD3)检测试剂盒不幸地碰到了高背景，那么也无需太担心，依次查看人维生素D3(VD3)检测试剂盒系统中的组分，并排除可能存在的题目。记住，非特异的抗体结合会增加背景。不外，它的缺点在于能与Protein A和IgG抗体相互作用。为了防止这一点，切勿使用过多的一抗或二抗。请勿使用高浓度（正常浓度为0.01-0.1%），它会降低特异结合，产生假阴性。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。目前主要有两种类型的封锁液：蛋白和非离子型去污剂。您当然也希望抗体只与目的蛋白结合吧。假如您一直被背景题目所困扰，那么也许您该花些时间来优化封锁液。
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