当前位置: 首页 » 新闻资讯 » 厂商 » 正文

如何火眼金睛的鉴别细胞支原体污染_91化工仪器网

分享到:
放大字体  缩小字体    发布日期:2019-09-02  来源:仪器信息网  作者:Mr liao  浏览次数:497
核心提示:支原体是非常微小的微生物,其直径只有0.2-0.8 m,是细胞培养中令人头疼的大问题。关键是其污染源简直来自四面八方:培养基血清实验操作者...会影响:细胞生长率细胞形态基因表达细胞代谢和细胞活力。 支原体感染不易察觉,因此对培养细胞定期进行支原体检测就非常重要。 污染实验室培养细胞的支原体主要有八种,但还没有哪种检测方法能够单枪匹马把这八种支原体都检测出来。支原体非常顽强,通常用于细胞培养的绝大多数抗生素都对其无效。例如青霉素主要作用于细菌细胞壁,但支原体没有细胞壁因此就不受影响。 无懈可击的细胞培养技
 

  支原体是非常微小的微生物,其直径只有0.2-0.8 m,是细胞培养中令人头疼的大问题。关键是其污染源简直来自四面八方:

培养基

血清

实验操作者

...

 

会影响:

细胞生长率

细胞形态

基因表达

细胞代谢和细胞活力。

 

支原体感染不易察觉,因此对培养细胞定期进行支原体检测就非常重要。

 

 

 

污染实验室培养细胞的支原体主要有八种,但还没有哪种检测方法能够单枪匹马把这八种支原体都检测出来。支原体非常顽强,通常用于细胞培养的绝大多数抗生素都对其无效。例如青霉素主要作用于细菌细胞壁,但支原体没有细胞壁因此就不受影响。

 

无懈可击的细胞培养技术始终是预防支原体感染的zui佳方式,另外及时找出受到支原体感染的培养物也很重要,这样才能在感染扩散前快速采取有效措施。刀王就为你介绍几种在培养细胞中检测支原体的常用方法。

 

分离培养法

 

分离培养法是支原体检测的金标方法,其检测度zui高。这种方法是从可疑的细胞培养体系中取样,并接种到zui适宜支原体生长的琼脂平板上。如果样本中含有支原体,它们就会在这种琼脂平板上疯狂生长,zui终形成明显可见的特征性菌落。分离培养法基本不会出现假阴性结果,因此被誉为支原体检测金标准。

 

不过分离培养法也存在两个弊端:

一是检测时间太长,支原体要长出明显克隆至少需要4周时间;

二是尽管可以检测绝大多数支原体种类,分离培养法也有力所不及的时候,例如支原体M.hyorhinis。

 

如果你实在不想等这么久,或者希望在分离培养法的等待过程中先拿到初步结果,你可以试一试DNA、PCR或酶学检测方法。不过需要注意的是,上述检测方法都不能单独检出所有类型的支原体,而且灵敏度也没有分离培养法高,所以zui好结合使用两种方法以获得zui可靠的检测结果。

 

DNA检测

 

DNA检测需要将可疑样品与指示细胞共同培养,因此一般需要几天时间。DNA检测所用的指示细胞通常是细胞质区域较大的Vero细胞,如果原样本中含有支原体,那么当细胞DNA被荧光染料(如Hoechst染料)染色时,就可以在指示细胞的核周围观察到荧光斑点或荧光颗粒。分离培养法用来检测支原体M.hyorhinis菌株并不可靠,而DNA法可以准确的将其检测出来。

 

 

 

PCR法

 

PCR法也可以检测M.hyorhinis菌株,PCR法检测支原体只需几个小时,是zui快但也是zui不灵敏的支原体检测方法。该方法采用针对支原体DNA的引物用PCR检测可疑样本,其中PCR引物通常针对支原体的16S rRNA基因。在凝胶电泳过程中,支原体DNA会显示为特异性条带,以此指示支原体的存在。PCR法可以检测大多数支原体,但谨慎起见zui好同时使用另一种检测方法来进行验证。

 

 

 

酶学检测和ELISA

 

此外,也还存在一些其他支原体检测方法。例如酶学检测是将可疑样本添加到特定底物中,在这一体系内支原体的酶可以将ADP转化为ATP,随后能利用ATP发光的luciferase酶就可以指示支原体的存在。ELISA也能用于支原体检测,以ELISA法为基础的支原体检测一般使用针对支原体16S rRNA基因的带标记探针或抗体,来检测培养物中是否含有支原体。

 

 

 

定期检测

 

支原体感染会使培养细胞慢慢枯萎,因此对培养细胞定期进行支原体检测非常重要。一般来说每1至3个月就应该进行一次支原体检测。将定期支原体检测常规化坚持下去,是细胞培养实验室应对支原体感染的关键。

 

 

 

预防支原体污染的建议:

细胞培养工作中,主要从以下几个方面来预防支原体的污染:

控制环境污染;

严格实验操作;

细胞培养基和器材要保证无菌;

在细胞培养基中加入适量的抗生素。

 

支原体污染细胞后,特别是重要的细胞株,有必要清除支原体,常用方法有

抗生素处理

抗血清处理

抗生素加抗血清和补体联合处理

 

支原体zui突出的结构特征是没有细胞壁,一般来讲,对作用于细胞壁生物合成的抗生素,如内酰胺类、万古霉素等完全不敏感;对多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺药物普遍耐药。对支原体zui有抑制活性及常用于支原体感染治疗的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些氟喹诺酮;其他类抗生素如氨基糖苷类、氯霉素对支原体有较小抑制作用,所以常不用来作为支原体感染的化学治疗剂。InvivoGen公司研究开发的新一代支原体抗生素M-Plasmocin能有效地杀灭支原体,不影响细胞本身的代谢,并且用M-Plasmocin处理过的培养细胞,不会重新感染支原体。

 

支原体污染在细胞培养中实际上是比较常见的, 据资料,可达30%甚至更高。支原体污染时细胞表现为长得不好,也不死亡,同时,培养基又是清亮的。时间长达一周也没有什么变化。这时基本上可以判断出是支原体污染了,愿意检测就检测一下,不愿意直接用清除试剂处理吧。

 

避免细胞污染,可以从预防着手,超净工作台物品放置要合理、进入细胞房要换鞋和穿实验服、实验员戴手套后要用酒精等消毒、避免细胞交叉污染等等。


关注本网官方微信 随时阅读专业资讯

 
 
打赏
[ 新闻资讯搜索 ]  [ 加入收藏 ]  [ 告诉好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 违规举报 ]  [ 关闭窗口 ]
免责声明:
本网站部分内容来源于合作媒体、企业机构、网友提供和互联网的公开资料等,仅供参考。本网站对站内所有资讯的内容、观点保持中立,不对内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。如果有侵权等问题,请及时联系我们,我们将在收到通知后第一时间妥善处理该部分内容。
 

如何火眼金睛的鉴别细胞支原体污染_91化工仪器网二维码

扫扫二维码用手机关注本条新闻报道也可关注本站官方微信账号:"xxxxx",每日获得互联网最前沿资讯,热点产品深度分析!
 

 
0相关评论