定点突变的意义及用途说明_91化工仪器网

定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因组，也可以是质粒）中引入所需变化（通常是表征有利方向的变化），包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征，是基因研究工作中一种非常有用的手段。

定点突变一般有以下流程：

1.对待突变基因测序结果进行分析，设计突变方案；

2.根据突变方案设计合成覆盖突变位点的双向引物，合成目的DNA两端引物，进行高保真PCR反应；

3.默认情况下，将PCR产物克隆至T载，或者根据要求亚克隆至目的载体；DNA测序验证突变序列的正确性。

定点突变一般须有含有待突变基因的高纯度质粒，不少于10 g，电泳图清晰，达酶切及测序要求。

定点突变的意义：

根据生物学理论知识，基因会发生突变，突变可以自发，也可以诱发。但在加拿大生物化学家M 史密斯（1932－2000年）发明定点突变法之前，突变株的产生必须经由自然界或用化学等方法诱使基因体突变。这类方法属于随机突变，突变株必须在生物形状上有所改变，才能确定有突变发生，但除非用分子生物方法或遗传方法找到此突变处，否则无法确定突变位置。也就是说，这种突变是盲目的。而史密斯发明的定点突变法却是有目的的，该法可经由设计好的寡核苷酸，在任何一个基因片段上进行随意或设计好的突变，也就是说，这种突变是预先设定好的，所以也有人将该法称为 反遗传法 。

定点突变用途：

几乎每个生物实验室都会用定点突变法来研究基因或蛋白质的功能。定点突变法的应用不仅广泛用于基因工程技术领域，还可用于农业培育抗虫、抗病的良种，用于医学矫正遗传病、治疗癌症等病。

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