荧光素异硫氰酸酯葡聚糖 CAS:60842-46-8 FITC DE
化学名:
葡聚糖(3 ,6 -二羟基-3-氧代螺(异苯并呋喃--1(3H),9 -[9H]占吨]-5(或6)-基)氨基硫代甲酸酯
荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖
荧光素基硫代氨基甲酰基-葡聚糖
CAS号:60842-46-8
结构
定义
MW:重均分子量
Mn:数均分子量
DS:定义为多糖链中每个糖分子上取代分子的数目
特性
用荧光素对基于天然葡聚糖B512F所制备的特选葡聚糖组分进行标记,标记时采用稳定的硫代氨基甲酰键连接基团,标记步骤不会导致葡聚糖发生任何降解1,FITC-葡聚糖的DS范围为0.002-0.008,在该取代低水平范围内,反应对葡聚糖本身所带来的变化被尽可能地减少了。这一点对渗透性研究而言非常重要。
FITC-葡聚糖以黄色/橙色粉末形式供应,其在水中可以自由溶解,也可以黄色溶液形态的盐溶液形式供应。该产品也可溶于DMSO、甲酰胺等某些极性有机溶剂,但不溶于低级脂肪醇、丙酮、Chloroform,CHCl3、二甲基甲酰胺。可以通过在剧烈搅拌下将粉末缓慢加入到温水(约60℃)中来实现高分子量组分的溶解。
分子量大于5 000道尔顿的葡聚糖分子在溶液中表现为柔性线团型(coil)链段。表1(下表)显示了不同分子量分子的尺寸。葡聚糖和FITC-葡聚糖呈现牛顿流动特性,即粘度与剪切速率无关。
葡聚糖Mw
Stokes半径
回转半径
2 x 106
270
380
1 x 106
199
275
500 000
147
200
200 000
130
130
100 000
69
95
70 000
58
80
40 000
44.5
62
10 000
23.6
-
表1.葡聚糖的分子尺寸。
光谱数据
图1. 在0.025M硼酸盐pH9.0(10mg 盐溶于50ml缓冲液中)中,FITC-葡聚糖70的荧光扫描光谱。激发波长:495nm;发射波长:520 nm。
图2.FITC-葡聚糖在pH 4-9范围内的荧光光谱(发射波长:520nm)
储存和稳定性
FITC-葡聚糖在体外和体内的稳定性都非常好 只有在高pH( 9)和高温下,荧光素标记才有发生水解的风险。在37 C的兔血浆、肌匀浆、肝匀浆和尿液研究中,FITC-葡聚糖的稳定期均不短于3天,Mw无任何变化,荧光素组分释放不可见。 在6%的TCA中,FITC-葡聚糖可以在室温下稳定3天2。高压灭菌的FITC-葡聚糖70溶液可以在8至50℃下储存长达5个月,只有50℃样品中的游离氨基-荧光素含量出现略微增加(1%)。FITC-葡聚糖在pH4下保持稳定,但在pH9下,其荧光强度会在35℃、1个月内出现相当大的下降(24%)。数项研究3均证实了在实验(1-6天)期间FITC-葡聚糖的体内稳定性。
FITC-葡聚糖的应用FITC-葡聚糖主要用于细胞和组织中的渗透性和运输研究,但也可用于其他材料(过滤器、凝胶等)的渗透性研究。其有一点独特优势在于通过测量荧光,可以提供健康或患病组织的实时渗透性定量数据。活体荧光显微镜具有高灵敏度,即使组织液中的荧光浓度低至1 g/ ml也可以检测得到。人们已经开发了数个模型来方便实时研究4,5,FITC-葡聚糖也可用作细胞中的pH探针6,7。人们在偏振实验中还发现,激发态的寿命与共轭之前的寿命差不多。
FITC-葡聚糖在以下研究领域都已表现出了自身价值(我们从各个主题的众多文章中挑选出来的参考文献):
肠道组织渗透性研究8-10脑和神经系统渗透性研究11-13肿瘤组织渗透性研究14-16眼内渗透性研究17-19肾组织渗透性研究20图3. 注入FITC-葡聚糖150后的颊囊图像。第二张图像显示了注入组胺后微血管出现的渗漏。 (已获得E.Svensj 许可)。
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