必拓生物T4 DNA连接酶，与NEB连接酶数据对比_91化工仪器网

T4 DNA连接酶（T4 DNA ligase）

T4 DNA连接酶是ATP依赖的DNA连接酶，催化两条DNA双链上相邻的5 磷酸基和3 羟基之间形成磷酸二酯键。可连接双链DNA的平末端、互补粘性末端及其中的单链切口，也能催化RNA连接到DNA或者双链RNA上，但不催化单链核酸的连接。必拓生物采用先进技术研制出高纯度、高品质的T4 DNA连接酶，媲美TaKaRa、NEB产品。

必拓 T4 DNA连接酶与NEB T4 DNA连接酶对比

选择酶切过的载体pNET/XcmⅠ（3.3kb，75ng/ l）和片段F3L（500bp，100ng/ l）用T4 DNA连接酶进行连接反应实验，然后转化*0，统计菌落数，测定阳性率。

一、T4 DNA连接酶不同用量数据对比

分别使用必拓 T4 DNA 连接酶和NEB的T4 DNA 连接酶进行连接，每10 l体系分别加入连接酶0.2 l/0.5 l /1 l，16℃连接30分钟，连接反应体系如下表（每个连接体系做两个平行管）：

连接体系必拓 T4 DNA 连接酶NEBT4 DNA连接酶载体( l)11片段( l)0.680.68连接酶( l)0.2/0.5/10.2/0.5/1buffer( l)2(5X)1(10X)总体积补水至10 l补水至10 l连接片段与载体分子数比66

16℃连接30分钟，转化*0感受态细胞，复苏产物直接取100 l涂板，37℃培养16小时，菌落计数，结果如下（感受态效率为2.07 X107）：

酶用量必拓 克隆数NEB 克隆数 1 l247317平均282阳性率10/1064 73 平均68.5 阳性率10/100.5 l80139平均109.5-5853平均55.5-0.2 l6883平均75.5-4795平均71-

二、T4 DNA连接酶不同连接时间数据对比

选取酶切过的载体（pNET）与片段（F3L约500bp）分别使用自产T4 DNA 连接酶和NEB的T4 DNA 连接酶进行连接5min、10min、30min，连接产物分别全部转化*0菌株感受态细胞，连接反应体系如下表（每个连接体系做两个）：

连接体系必拓 T4 DNA 连接酶NEBT4 DNA连接酶载体( l)11片段( l)0.680.68连接酶( l)0.50.5buffer( l)2(5X)1(10X)总体积补水至10 l补水至10 l连接片段与载体分子数比66

复苏产物直接取100 l涂板，37℃培养16小时，菌落计数，结果如下（感受态效率为2.07 X107）：

连接时间必拓 克隆数NEB 克隆数 5 min3552平均43.5-21 38 平均29.5 -10 min2625平均25.5-1538平均17.5-30 min3927平均33阳性率10/104036平均38阳性率9/10

T4 DNA连接酶预混液(Ligation Mixture)

必拓生物经优化配方后，特别研发的含有T4 DNA连接酶，及连接反应所需各组分的制剂，其中还含有增强连接反应的成分，实验时只需向DNA溶液中加入T4 DNA连接酶预混液，即可短时间内方便的将载体和外源片段进行连接，反应产物可以直接用于转化。

必拓 T4 DNA连接酶预混液与TaKaRa数据对比

反应体系1

反应1对照1体积PCR产物（1000bp）PCR产物（1000bp）3.5 l(35ng)载体pMD19-T载体pMD19-T0.5 l(40ng)必拓 Ligation MixtureTaKaRa solution I4 l

反应条件：16度连接3小时
转化连接产物：5 l
阳性克隆数

反应克隆数阳性率有效克隆数反应1127010/101270对照114698/101175

电泳图1：下排是反应1，上排是对照1
 
反应体系2

反应2对照2体积PCR产物（2000bp）PCR产物（2000bp）4.5 l(35ng)载体pMD19-T载体pMD19-T0.5 l(40ng)必拓 Ligation MixtureTaKaRa solution I5 l

反应条件：16度连接3小时
转化连接产物：5 l
阳性克隆数

反应克隆数阳性率有效克隆数反应2347510/103475对照251509/104635

电泳图2：下排是反应2，上排是对照2 

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