用于免疫检测的所谓 标准曲线"其实称为拟合曲线比较适合。免疫检测时标准点(可所以倍比稀释的,也能够不是)浓度假如和相应的吸光度(OD)值假如能够呈现直线联络当然是zui志向的了,这时能够通过EXELL等便当的获得拟合曲线,进而推算出样品的浓度值。但我们做免疫检测很少有时候能够有这么志向的情况,标品浓度和相应OD值往往是"S"型的曲线联络,这时就不能用直线拟合的方法了,而对拟合方法进行选择就是必要的了。
关于标准曲线的拟合方法,直线、二次曲线、三次曲线、指数、对数等虽都可用于ELISA及其它生物学反应中的曲线拟合,但都只适用于曲线的一部分,有的适用于前半段,有的适用于后半段,有的适用于中心一段,而Logistic曲线则对曲线的全部都有较好的适用性。当然,假如用于定量,仍是在中心一段较好。这些方法尽管没有一种方法能够通用,但也都能够用。关键在于你的标准曲线做到了S形的哪一部分,你想检测的样品浓度在曲线的哪一部分。在S曲线的低浓度部分能够用乘幂方程很好的拟合,中低浓度部分能够用直线方程,中心部分可用对数方程,而中后段可用四参数。
其实,在一个长的区间内,Logistic应该都能拟合得较为志向。但并不是说它就是的。现实上不仅是ELISA,其它许多生物学反应都是S形曲线,也都能够用Logistic曲线拟合。但建模型是一回事,而用它来定量是另一回事。假如用来定量,S形曲线的中心段(较陡处)是比较好的,而两端的平 坦部分计算误差会大,有时甚至会很大。
现在国际上zui盛行的免疫检测拟合方法是 四参数逻辑拟合",用这种拟合方法往往能够比较的反映浓度和吸光度的曲线联络,然后进一步比较正确的获得样品中待测物质的浓度值。
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