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产品简介 核酸外切酶III能作用于双链DNA,沿3’→5’方向逐步切去单核苷酸。与底物的每次结合,只切除Z末的几个核苷酸,从而对双链DNA产生渐进缺失。Z适底物是平末端或3’凹陷末端DNA,亦可作用于双链DNA的切割产生单链gap,对于对单链DNA无活性。3’突出末端抗该酶的切割,拮抗程度随3’突出末端的长度而改变,四碱基或更长的突出完全不能被切割。
详细介绍
核酸外切酶III说明
核酸外切酶III能作用于双链DNA,沿3 5 方向逐步切去单核苷酸。与底物的每次结合,只切除zui末的几个核苷酸,从而对双链DNA产生渐进缺失。zui适底物是平末端或3 凹陷末端DNA,亦可作用于双链DNA的切刻产生单链gap,对于对单链DNA无活性。3 突出末端抗该酶的切割,拮抗程度随3 突出末端的长度而改变,四碱基或更长的突出完全不能被切割。这种特性对于一端是抗性位点(3 突出端)一端是敏感位点(平端或5 突出端)的线性DNA分子,可以产生单向缺失。例如,可将双链DNA用产生不同末端的限制性内切酶双酶切后,利用Exonuclease III的3 5 的外切酶活性,从一端降解,得到互补的单链DNA和5 -P单核苷酸。与BAL 31 Nuclease相比,本酶的碱基特异性较小,如在富含GC的位置上,由于反应停止的机率较低,可用于DNA的Deletion制作。
本是把exonuclease III基因( E. coli)在大肠杆菌中进行表达后,经多次纯化分离而得到的。
质量保证
本经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。
使用建议
不能切割硫代磷酸的桥连。因此,也可以通过引入一个硫代磷酸核苷酸将DNA分子的一端位点保护起来,再创建单向缺失。
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