细胞系活性检测方法之乳酸脱氢酶(LDH)释放法
LDH是活细胞浆内酶,当细胞损伤,细胞膜通透性变化时,会将LDH释放到培养液中。因此培养液中该酶的活性与被裂解的细胞系数量成正比。由LDH催化的酶促反应在催化乳酸生成丙酮酸的过程中使氧化型辅酶I(NAD)变成还原型辅酶I(NADH+H),后者再通过递氢体一吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化四氯唑(INT),INT接受氢离子被还原成紫红色的化合物,酶标仪检测其OD值。与结晶紫染色法和MTT比色法进行灵敏度、重复性和相关性比较,该法简便,灵敏度高,敏感性、客观性、试剂成本及测定速度等都要优于结晶紫染色法和MTT比色法。
LDH法常用于NK细胞系、CTL细胞活性检测,从而评价机体免疫功能;与免疫常用方法Cr释放法相比,操作省时和不存在同位素污染等优点,引起人们很大兴趣。但此法影响因素较多,诸如培养基、pH值、温度及加底物显色时间和终止剂等,实际操作不易掌握。
类似以上通过检测细胞内酶活性的变化从而间接判断细胞活性的方法还有很多,如酸性磷酸酶法(Acid phosphatasi assay,APA),利用酯酶的荧光素双醋酸酯(FDA)法等。
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