HUVEC-C人脐静脉内皮细胞|HUVEC-C细胞_人正常细胞-上海素冉生物科技有限公司

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细胞名称HUVEC-C人脐静脉内皮细胞|HUVEC-C细胞

生长特性 贴壁生长

形态特性 上皮样

产品规格 1 10^6 cells/瓶

培养条件 MEM+10%FBS+1%P/S

生长条件 气相：5%CO2  95% 空气   温度：37 ℃

冻存条件 90%FBS+10%DMSO

背景资料 最初认为这个细胞源自喉上皮癌，但随后通过同功酶分析、HeLa标记染色体和DNA指纹分析发现，起源细胞已被HeLa污染。 角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。

HUVEC-C人脐静脉内皮细胞|HUVEC-C细胞常规说明：

冻存液成分：10%DMSO+40%FBS+50%基础培养液

细胞质检情况：不含细菌、真菌、支原体等微生物污染

传代建议：1:2~1:3传代，2~3天换液1次

特别提醒：签收细胞后，如细胞状态不佳，或培养中遇到问题，烦请当天尽快联系，以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据，请务必重视。

一、 细胞复苏

1. 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。

3. 把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。

4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。

5. 3天换一次培养基。

HUVEC-C人脐静脉内皮细胞在进行细胞传代培养的时候，胰蛋白酶作用的时间是在1～3分钟，由于我有好几个培养瓶（4个以上）的细胞都需要进行传代操作，那么就胰酶消化这一步而言，我是该一个培养瓶一个培养瓶这么分开做，还是可以几个同时做呢？同时做我怕后来操作的培养瓶中的细胞消化过度啊！一个一个的做会不会又太费时呢？

培养基 D-MEM/F-12培养基(GIBCO,货号12400024，添加L-glutamine 150mg/L, NaHCO3 1.5g/L)，90%；0.3mg/ml G418；优质胎牛血清，10%。 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：33.5摄氏度。
生长特性 贴壁生长

1、一个一个做！防止污染，和消化细胞时间的不均匀。

2、原则上，为了避免细胞系之间的污染，应该一个一个的做。但是如果你能保证无菌操作的原则，

HUVEC-C人脐静脉内皮细胞也能把握好各种贴壁细胞系消化的时间，是可以同时做，这样效率高。建议你刚开始一个一个的做，熟练以后根据具体情况决定如何做。

3、4个可以同时做，时间到了用移液枪给4个瓶加含血清的培养基终止就行。

4、新手的话强烈建议一个一个处理细胞，特别是消化，除非你养的细胞对消化都不敏感，不然很容易消化过度或者不到位。另外同时处理多个细胞容易出现细胞间交叉污染，一旦污染基本没救，比细菌污染还要麻烦。

5、刚开始还是一个一个来，HUVEC-C人脐静脉内皮细胞消化的时间与细胞的来源有很大关系，贴壁性强的细胞，需要消化的时间较长。一般除了贴壁性强的癌细胞外，细胞消化时间1-3min，还有胰蛋白酶的浓度有关系，浓度高的消化时间要短一些，不然会消化过了，对于细胞的生长不好。你可以在分散打入胰蛋白酶时，轻晃培养瓶，在显微镜下看见细胞开始变亮，皱缩，卷边的时候就加入培养液或者血清终止消化。

失败的关键原因还是细胞复苏的时候没有迅速解冻的缘故，最后一次成功是因为注意到这个问题。细胞的复苏及冻存遵循慢冻速融原则，如果HUVEC-C人脐静脉内皮细胞取出后没有在尽可能短的时间里解冻的话细胞内部会产生很多冰晶对细胞就有致命的损失了。另外，细胞的确应该是在液氮条件下保存，如果液氮可以保存1-2年的细胞，放-80度保存恐怕不到三个月就不行了，并且状态会很差。ZYC3821   神经前体细胞培养基   NPrCM   形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样   培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3822    神经细胞培养基   NM   形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样   培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3823    少突胶质前体细胞培养基   OPCM   形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样   培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3824    球状少突细胞培养基   OsM   形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样   培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3825    角质细胞培养基   KM   形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样   培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3826    角质细胞培养基（确定）    KM-d   形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样   培养条件：MEM/F12 +10% FBS 

细胞培养常见问题及解决方法

问题

原因

解决方案

细胞生长缓慢

生长培养基使用不当

按照生产商的建议，使用相应的预热生长培养基。

生长培养基中血清质量差

使用其他批次血清。

传代操作不当

按照生产商的建议消化时间及传代比例进行操作。

换液过于频繁

降低换液频率，参考生产商推荐的换液频率。

细胞传代次数过多

使用传代次数较少的健康细胞。

细胞生长超过汇合状态

哺乳动物细胞传代应在细胞处于对数期、未达到汇合状态时进行，建议细胞密度达 80-90%传代。

细胞被支原体污染

将细胞、培养基和试剂丢弃；新取一只冻存细胞，并且使用新的培养基和试剂。

细胞复苏存活率低

细胞冻存不当

新取一只冻存细胞，并储存在液氮中。将细胞储存在液氮中，直至复苏。

自行制备的冻存细胞无活性

将细胞按照生产商推荐的密度冻存。

制备冻存细胞时使用传代次数少的细胞。

严格按照生产商推荐的操作程序冻存细胞。请注意本手册推荐的冷冻程序是冻存细胞的一般流程，只能作为指导原则使用。

新取一只冻存细胞。

细胞复苏方法不当

严格按照生产商推荐的操作程序复苏细胞。请注意本手册推荐的解冻程序是复苏细胞的一般流程，只能作为指导原则使用。

确保冷冻细胞解冻迅速，接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。

复苏培养基使用不当

使用生产商推荐的培养基。确保培养基使用前已经预热。

细胞稀释过度

按照生产商的建议，将解冻后的细胞高密度接种，以改善复苏效果。

处理细胞时动作不够轻柔

冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影 响。不要通过涡旋振荡或者用力敲打培养瓶的方法使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外)，也不要高速离心细胞。

冻存液中所用保护剂在储存过程中未避光

如果未避光储存，冻存保护剂会转变为对细胞有毒性的物质；新取一只冻存保护剂，重新冻存细胞。

 ★由于细胞库现有细胞类目多，为了不出现混乱错误，需要了解相关细胞价格及详细资料直接call，对您造成的不便还请见谅！
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最后，通过低温保藏储备一些细胞，以防支原体大面积来袭。如果支原体有抬头的迹象，或常规检测呈阳性结果，那么最可靠的补救措施是扔掉所有培养物，清洁培养箱和超净台，一切从头开始。当然，你得确保储备的细胞是不含支原体的。