如何看懂质粒图谱和质粒上各个元件_91化工仪器网

如何看懂质粒图谱和质粒上各个元件具体作用是什么。

看载体图谱大部分可以根据以下几步来理解：

*步：首先看Ori的位置，了解载体的类型（原核/真核/穿梭载体）Ori的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。

所谓穿梭载体是指一类人工构建的具有两种不同复制起点和选择标记，因而可以在两种不同类群宿主中存活和复制的质粒载体。此概念不仅用于不同的微生物菌群之间，也可以推广到真核生物表达载体的构建，如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳动物表达载体pMT2 和用于植物细胞的Ti 质粒。这些穿梭载体不仅可以在大肠杆菌中复制扩增，也可以在相应的枯草、酵母、动物或植物细胞中扩增和表达。这样利于对质粒的分子生物学操作和大量制备。

第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。

（1）Ampr 水解 －内酰胺环，解除氨苄的毒性。
（2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。
（3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
（4）neor（kanr） 氨基糖苷磷酸转移酶 使G418（长那霉素衍生物）失活
（5）hygr 使潮霉素 失活。

第三步：看多克隆位点（MCS）。
它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。

第四步：再看外源DNA插入片段大小。
一般来说，外源DNA的片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。

第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用哪种载体，还是要以实验目的为准。
要把一个有用的目的基因通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体。载体有克隆载体，看懂质粒图谱是将目的基因装入载体前必须要做的功课，只有看懂质粒图谱才知道如何将目的基因装入载体及所要用的载体的大致用途。

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