细胞色氨酸羟化酶 （Tryptophan Hydroxylase）-资料下载-上海铭博生物科技有限公司

细胞色氨酸羟化酶 （Tryptophan Hydroxylase）活性比色法定量检测试剂盒

产品说明书（中文版）

主要用途

 细胞色氨酸羟化酶 （Tryptophan Hydroxylase）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过底物色氨酸和四氢生物蝶呤在色氨酸羟化酶的催化下，产生5-羟色胺酸，进而使用福林酚试剂与之反应，生成蓝色产物，呈现吸光峰值的增高，即采用比色法来测定细胞裂解萃取样品中酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取悬液样品（动物、人体、昆虫等）色氨酸羟化酶的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

色氨酸羟化酶 （Tryptophan Hydroxylase；TPH；EC1.14.16.4），又称为色氨酸单加氧酶（Tryptophan 5-monooxygenase）是芳香族氨基酸羟化酶家属中的成员，通过将羟基基团加在色氨酸的5 位上，产生5-羟色胺酸（5-hydroxytryptophan；5-HTP），成为神经传递介质5-羟色胺（serotonin）的前体。色氨酸羟化酶分为2个亚型：TPH1和TPH2。前者在外周末梢和中枢神经系统高度表达，例如皮肤、内脏、松果体，后者只在神经元上高度表达。其活性异常将导致与5-羟色胺生成信号通路（serotonergic pathway）有关的精神疾病，包括抑郁、精神分裂、强迫症、*行为等的病理演变。基于底物色氨酸和四氢生物蝶呤（tetrahydrobiopterin）在色氨酸羟化酶的催化下，产生5-羟色胺酸和二氢生物蝶呤（dihydrobiopterin），进而使用福林-乔卡尔泰乌酚试剂 （Folin -Ciocalteu phenol reagent），在碱性条件下，与5-羟色氨酸反应，生成蓝色产物，在分光光度仪下（736nm波长）检测，来定量分析色氨酸羟化酶的总活性。其反应系统为：

产品内容

 清理液（Reagent A） 毫升

 裂解液（Reagent B） 毫升

 缓冲液（Reagent C） 毫升

 反应液（Reagent D） 微升

 显色液（Reagent E）   毫升

 强化液（Reagent F）   毫升

 阴性液（Reagent G）   毫升

产品说明书   1份

保存方式

保存 裂解液（Reagent B）、 缓冲液（Reagent C）和 反应液（Reagent D）在－20℃冰箱里； 其余的保存在4℃冰箱里； 显色液（Reagent E）避免光照；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器

15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器

细胞刮脱棒：用于脱离细胞

DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞

（微型）台式离心机：用于样品制备

比色皿：用于比色的容器

分光光度仪：用于比色分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的 裂解液（Reagent B）置入冰槽里融化。然后进行下列操作。