美国Bio-Rad伯乐变性梯度凝胶电泳DGGE-91化工仪器网

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运用DGGE搜寻未知突变

DGGE 是基于以下原理，即增加聚丙烯酰胺凝胶内变性剂的浓度会熔解双链DNA 的不同区域。当温度达到zui低熔解度区域的熔解温度Tm 时，DNA 部分熔解，在凝胶中形成迁移率下降的分支分子（Myers et al.1987）。在均一的运行温度（50 65 C）和尿素与甲酰胺线性变性梯度条件下即形成了变性环境。梯度以垂直或平行于电泳方向形成。DGGE 是zui灵敏的突变检测方法，其效率可达99%（Grompe 1993）。DCode 系统通过以下途径优化DGGE：

DGGE 的两种模式。A ，凝胶的变性梯度方向与电泳方向垂直。从原生乳腺癌种扩增的p53 基因6 号外显子的野生型和突变型等位基因通过垂直DGGE（80V，56 C，2 小时）分离。感谢AL Borresen, Radium Hospital, Oslo, Norway 提供的数据。B ，凝胶的变性梯度方向与电泳方向平行。p53 基因8 号外显子的野生型和突变型等位基因在8%丙烯酰胺：甲叉37.5：1 平行梯度（40 65% 变性剂）凝胶上，1 x TAE 缓冲液， 60 C，150 V，电泳2.5 个小时。左泳道，突变型等位基因；中，野生型等位基因；右，突变型与野生型等位基因。

DGGE分离示意图。所示为一个变性梯度方向与电泳方向垂直的凝胶，以及一个有单个熔解区域的目标序列。野生型和突变型样品加入到制备孔内。在低变性剂浓度时，DNA 片段为双链，但当浓度增加时双链DNA 开始熔解，形成分枝分子。到浓度非常高时，DNA 片段可熔解形成2条单链。

运用DGGE搜寻未知突变

DGGE 是基于以下原理，即增加聚丙烯酰胺凝胶内变性剂的浓度会熔解双链DNA 的不同区域。当温度达到zui低熔解度区域的熔解温度Tm 时，DNA 部分熔解，在凝胶中形成迁移率下降的分支分子（Myers et al.1987）。在均一的运行温度（50 65 C）和尿素与甲酰胺线性变性梯度条件下即形成了变性环境。梯度以垂直或平行于电泳方向形成。DGGE 是zui灵敏的突变检测方法，其效率可达99%（Grompe 1993）。DCode 系统通过以下途径优化DGGE：

DGGE 的两种模式。A ，凝胶的变性梯度方向与电泳方向垂直。从原生乳腺癌种扩增的p53 基因6 号外显子的野生型和突变型等位基因通过垂直DGGE（80V，56 C，2 小时）分离。感谢AL Borresen, Radium Hospital, Oslo, Norway 提供的数据。B ，凝胶的变性梯度方向与电泳方向平行。p53 基因8 号外显子的野生型和突变型等位基因在8%丙烯酰胺：甲叉37.5：1 平行梯度（40 65% 变性剂）凝胶上，1 x TAE 缓冲液， 60 C，150 V，电泳2.5 个小时。左泳道，突变型等位基因；中，野生型等位基因；右，突变型与野生型等位基因。

DGGE分离示意图。所示为一个变性梯度方向与电泳方向垂直的凝胶，以及一个有单个熔解区域的目标序列。野生型和突变型样品加入到制备孔内。在低变性剂浓度时，DNA 片段为双链，但当浓度增加时双链DNA 开始熔解，形成分枝分子。到浓度非常高时，DNA 片段可熔解形成2条单链。