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更新时间:2019-03-13
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杨小姐(联系我时,请说明是在91化工仪器网上看到的,谢谢)
公司主营: 各种实验代做:WB代做,免疫组化,PCR代做,细胞检测,食品安全检测试剂,兽药残留检测试剂,动物疫病类检测,销售高品质标准品,对照品,ELISA试剂盒,细胞,血清,等等
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免疫组化试剂盒使用说明书
工作原理:
辣根过氧化物酶(HRP)的分子量(40000),它不会遮盖抗原的结合部位,具有较高活性及特异性,可溶性佳,生成的产物不扩散,可作用于多种底物,产生不同颜色且HRP穿透力强,易进入细胞内。DAB在 H2O2存在的情况下,可以作为HRP的电子供体,产生褐色的不溶颗粒,可作为显色的试剂。
试剂盒内容:
名称
规格
1
0.01mol/L pH6.0枸橼酸盐缓冲液
1L
2
PBS缓冲液
2L
3
广谱二抗
3mL
4
30%H2O 2
10 mL
5
DAB显色液I
0.6mL
6
DAB显色液II
0.6mL
自备试剂:无水乙醇、苏木素。
操作步骤:
1. 60℃常规脱蜡至水后,将石蜡切片先后浸入二甲本苯Ⅰ,二甲本苯Ⅱ各10min。然后逐级降浓度酒精入水,每次3-5 min。
①
无水洒精
3-5min
②
90% 酒精
3-5min
③
85% 酒精
3-5min
④
75% 酒精
3-5min
⑤
PBS洗涤3次
每次5 min
2.热修复抗原: 将切片置于0.01mol/L pH6.0枸橼钠缓冲液,微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10 min后,反复1-2 次,置于室温自然冷却。0.01 mol/L pH6.0的PBS洗涤3次,每次5 min
3.消除内源性过氧化物酶:用3% H 2 O 2 室温孵育 5-10 min,以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗涤2-3次,每次5 min;
4.滴加一抗: 滴加适当稀释的一抗到切片上,37℃孵育1小时左右或者4℃过夜, pH7.4的PBS洗涤3次,每次5 min 。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)
5.加入广谱二抗,37℃孵育1小时,取出后PBS洗涤3次,每次5 min。
6.DAB显色: 取DAB显色液I及II各50微升加至入1mL的水中,配成DAB工作液,滴加到切片上,室温显色,镜下控制反应时间。若无背景出现则可继续显色。蒸馏水充分洗涤以终止反应。
7..观察显色后自来水冲,苏木目精复染1-2min,,自来水冲10min,梯度酒精脱水,二甲本苯透明,中性树胶封片,干燥,分析拍照
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