防止蛋白降解
整体规矩:蛋白酶普遍存在,在提取蛋白质的过程中,早些按捺,常常按捺分装蛋白溶液,贮存于不同的温度和不同的缓冲液中,测蛋白活性,找出zui适贮存条件冷藏,并加入稳定剂。这些稳定剂一般都能充沛坚持蛋白的生物学活性。将蛋白溶液储于50%(V/V)的甘油或悬于硫酸铵(3.2M)中,防止冻存冰结晶会形成物理剪切及蛋白变性。防止酶的重复冻融,如果酶需求冻存,分装成小管后冻存。
蛋白质的贮存
蛋白样品在液氮中速冻,拿出后加入10-20%的甘油,长时间贮存,整个试验过程中,都要将蛋白样品置于冰上。
从母管中吸取不同的蛋白时,都要用新鲜的枪头不要将未用的溶液倒回母管,戴手套操作,防止蛋白交叉污染,或是蛋白酶的污染,防止剧烈的震动,防止溶液中混入蛋白变性剂,试验的过程中应防止尘埃进入,尘埃包括60%的肌氨酸。
操作过程
操作时总是小体积小量的操作,防止污染,而且动作要快
下面为常见的蛋白酶类型及相对应的按捺剂:
a:此类蛋白酶在活性中心包括丝氨酸和组氨酸。
b:此类蛋白酶在活性中心包括半胱氨酸(巯基,-SH-)。
c:此类蛋白酶在活性中心包括金属离子(如:Zn2+,Ca2+,Mn2+)。
d:此类蛋白酶在活性中心包括天冬氨酸族。
关注本网官方微信 随时阅读专业资讯