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大鼠去甲肾上腺素（NE）酶联免疫
检测试剂盒使用说明书 AE98983Ra
使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测大鼠去甲肾上腺素（NE），只能用于研究用途，不得用于医学诊断。
用 途：用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中去甲肾上腺素（NE）测定。
工作原理
本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中大鼠去甲肾上腺素（NE）水平。向预先包被了大鼠去甲肾上腺素（NE）单克隆抗体的酶标孔中加入大鼠去甲肾上腺素（NE），温育；温育后，加入生物素标记的抗NE抗体。再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠去甲肾上腺素（NE）的浓度呈正相关。
试剂盒组成
试剂盒组成
48孔配置
96孔配置
保存
说明书
1份
1份
封板膜
2片（48）
2片（96）
密封袋
1个
1个
酶标包被板
1 48
1 96
2-8℃保存
标准品400 ng/L
0.5ml 1瓶
0.5ml 1瓶
2-8℃保存
标准品稀释液
3ml 1瓶
6ml 1瓶
2-8℃保存
链霉亲和素-HRP
3 ml 1瓶
6 ml 1瓶
2-8℃保存
生物素标记的抗NE抗体
0.5ml 1瓶
1 ml 1瓶
2-8℃保存
显色剂A液
3 ml 1瓶
6 ml 1瓶
2-8℃保存
显色剂B液
3 ml 1瓶
6 ml 1瓶
2-8℃保存
终止液
3ml 1瓶
6ml 1瓶
2-8℃保存
浓缩洗涤液
（20ml 20倍） 1瓶
（20ml 30倍） 1瓶
2-8℃保存
需要而未提供的试剂和器材
37℃恒温箱。标准规格酶标仪。精密移液器及一次性吸头蒸馏水，一次性试管吸水纸注意事项
从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求
1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
操作程序
标准品的稀释：(本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)200 ng/L
5号标准品
120 l的原倍标准品加入120 l标准品稀释液
100 ng/L
4号标准品
120 l的5号标准品加入120 l标准品稀释液
50 ng/L
3号标准品
120 l的4号标准品加入120 l标准品稀释液
25 ng/L
2号标准品
120 l的3号标准品加入120 l标准品稀释液
12.5 ng/L
1号标准品
120 l的2号标准品加入120 l标准品稀释液
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。加样：1）空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗NE抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂A B和终止液，其余各步操作相同；2）标准品孔：加入标准品50ul，链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加)；3）待测样品孔：加入样本40ul，然后各加入抗NE抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul，盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37℃温育60分钟。配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。显色：每孔先加入显色剂A50ul，再加入显色剂B50 l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 终止：每孔加终止液50 l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。操作程序总结：
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批间应分别小于9%和15%
检测范围：
检测范围：8 ng/L -200 ng/L。
保存条件及有效期：
保存：2-8℃。
有效期：6个月(2-8℃)。
