双荧光素酶报告系统 报告基因是一种编码能够检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,在调控序列控制下进行表达,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控,筛选得到转化体。 双荧光素酶报告系统是现代社会先进的研究基因表达调控的实验工具。它通过一个带有报告基因的重组质粒导入细胞,然后通过检测目的基因所表达的荧光素酶来确定调控序列在表达调控中所起的作用。与一般的荧光素酶检测系统不同,该系统还附带一个对照基因,可以有效去除由于转染效率带来的实验误差。这一平系统的核心为pGL系列质粒,该质粒带有一个报告基因,并在该基因前有一系列多克隆位点。报告基因产生的荧光素酶可用试剂检测。我们可以在该位点插入调控序列后转染到目标细胞中去。如果该调控序列未起效,则荧光素酶不表达。相反,如果检测到荧光素酶,则说明该序列为有效的调控序列。几种常见的报告基因:1氯霉素乙酰基转移酶(CAT):2 半乳糖苷酶3.荧光素酶4.分泌型碱性磷酸酶5.荧光蛋白家族
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