手机版|
二维码|
实验原理
以蛋白酶K 和SDS 裂解细胞释放DNA，而DNA 在浓度较高的氯化钠溶液中的溶解度很高，Na 与带负电的DNA 结合成DNA 钠盐，这时DNA 在溶液中呈溶解状态。以抽提DNA，去除溶液中蛋白杂质后以3M NaAc 沉淀DNA。
实验试剂
1. TE buffer（pH 8.0）
2. 蛋白酶K
3. SDS
4. 饱和氯化钠
6. 3M NaAc（pH 5.2）
7. 异丙醇
8. 乙醇
实验设备
1. 电热恒温水槽
2. 高速离心机
实验材料
抗凝外周全血
实验步骤
1. 取0.5 ml 抗凝外周全血，加入0.8 ml 生理盐水混匀后，室温离心10000rpm 1min。
2. 弃上清，留0.1 ml 沉淀，加入0.4 ml TE，悬浮细胞后加入10 mg/ml 蛋白酶K 5 l (终浓度100 g/ml)，10% SDS 50 l (终浓度1%)，并轻轻混匀。
3. 37℃水浴消化过夜。
4. 加入1/3 体积饱和氯化钠，并充分混匀，静置10 min 后以10000 rpm 离心10 min。
5. 取上清液于另一新管内（1.5 ml Eppendorf 管），加入等体积并充分混匀，离心同步骤4。
6. 小心吸取水相至另一新管内，加入1/10 体积的3 M NaAc（pH 5.2）混匀后，加入0.7 体积的异丙醇并轻轻混匀， 10000 rpm 离心5 min。
7. 弃上清，加入70%乙醇0.5 ml，可见乳白色絮状DNA 团块，充分洗涤DNA沉淀，离心步骤同6。
8. 尽可能弃净上清液，空气中干燥或置37℃温箱，干燥DNA 5 min。
9. 加入TE（pH 8.0）20～50 l 溶解DNA，4℃存放待用。
注意事项
步骤6 中，在将上清转移到一个新管过程中，注意只吸取水相液体，该步骤是获得高纯度DNA 的关键。
关注本网官方微信 随时阅读专业资讯
