什么都能用多聚甲醛固定吗?_91化工仪器网

 前言：我们实验中，标本中大多数神经激素、肽类物质,以及蛋白质为水溶性，在用于研究之前，常需固定,即使其凝固以降低其水溶性。甲醛能与蛋白质的氨基反应，使蛋白质凝固，因此在医药上可做检验时的组织固定剂、以及防腐剂等。而在固定剂中，zui常用的是多聚甲醛。

多聚甲醛染色前固定：
   做实验的过程中，因为排不上实验仪器、希望标本能够较长时间存放等等原因，很多实验人员习惯性都会用4％多聚甲醛预先固定标本。也有为了灭活标本里面可能存在的微生物（细菌、病毒等），起到安全保障作用；或者是做胞内染色前的准备，进行固定细胞。

  然而，可能很多人忽视了一点，就是如果在染色之前用多聚甲醛固定标本，细胞表面有些位点在固定后构象发生改变，使得抗体无法结合产生假阴性，也可能由于固定作用，导致其它位点产生非特异性结合（假阳性）。

   因此，知道哪些抗体染色前不能预固定，十分重要。

多聚甲醛染色后固定：
   染色后的固定，就与抗原构象关系不大了，更多的是荧光素。以前4色以内的时候，用的荧光素都是非串联的，因此大多数影响不大，但随着各种新型串联染料的出现，多聚甲醛固定就成了问题了。

   事实上，当您去搜索串联染色标记（如PE-cy7、APC-cy7等）的抗体时，会发现一些比较详细的描述里面会注明，用多聚甲醛固定过的样本，必须在4小时内检测，否则容易导致串联染料降解，若要长时间保存，还是需要洗涤后，转移到不含多聚甲醛的缓冲液中。

   需要注意的是，做GFP荧光检测的同学，也需要注意一下，多聚甲醛固定也会影响GFP，多聚甲醛固定后，并非使GFP荧光淬灭，而是使GFP蛋白构象发生改变，无法产生荧光。有时候您固定后检测到的荧光可能是自发荧光，或剩余的未被改变构象的GFP发出的。

解决方案：
1、 如果检测的是前述表格中容易被多聚甲醛影响的分子，请尽量不要预固定，如需长期保存样本，可以考虑冻存单个核细胞。
2、 如果检测的是前述表格中不会受多聚甲醛影响的分子，可用1％多聚甲醛固定保存，但FSC、SSC和荧光强度影响较大。
3、 如果希望在染色后保持较长时间荧光稳定，仍建议：避光4度，如果仍不放心，可考虑购买商品化的适用于串联染料的专用固定剂。

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