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详解肿瘤细胞侵袭实验步骤_91化工仪器网

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放大字体  缩小字体    发布日期:2019-09-02  来源:仪器信息网  作者:Mr liao  浏览次数:101
核心提示:肿瘤细胞侵袭能力检测在肿瘤学(迁移、侵袭)和免疫学(迁移、趋化)中是常规实验。1.侵袭是细胞迁移的一种。细胞迁移分三种类型:趋触、趋化和侵袭。2.肿瘤细胞的侵袭性是肿瘤相关信号通路、药物治疗、靶向治疗、致癌/抑癌基因等肿瘤学研究的一个重要指标。3.免疫细胞具有趋化性,例如粒细胞、巨噬细胞、单核细胞对CCL、CXCL类因子的趋化性,免疫细胞异常(如过度趋化)通常会引起一些炎症类疾病如风湿、关节炎、牛皮藓、动脉粥样化等。具体操作以配合24孔板的8 M PET膜Millicell 悬挂式细胞培养小室(cat#M

肿瘤细胞侵袭能力检测在肿瘤学(迁移、侵袭)和免疫学(迁移、趋化)中是常规实验。
1.侵袭是细胞迁移的一种。细胞迁移分三种类型:趋触、趋化和侵袭。
2.肿瘤细胞的侵袭性是肿瘤相关信号通路、药物治疗、靶向治疗、致癌/抑癌基因等肿瘤学研究的一个重要指标。
3.免疫细胞具有趋化性,例如粒细胞、巨噬细胞、单核细胞对CCL、CXCL类因子的趋化性,免疫细胞异常(如过度趋化)通常会引起一些炎症类疾病如风湿、关节炎、牛皮藓、动脉粥样化等。
具体操作
以配合24孔板的8 M PET膜Millicell 悬挂式细胞培养小室(cat#MCEP24H48)为例,实验周期:3-5天
1.复苏代数靠前的肿瘤细胞,在含有10% FBS的培养基 中预先培养2-3代,待细胞汇合达到80%左右,饥饿处 理18-24小时。
2.准备铺胶:
a) 4 C溶EMC胶过夜。
b) 将细胞小室、培养板和枪头等于4 C 预冷。
c)用无血清的冷培养基稀释ECM胶至20ug/mL,以5-10ug/cm2的密度加入到细胞小室的上层(按照ECM产品说明书的推荐比例和体积),轻轻摇晃使胶均匀铺在膜上。以上操作在冰上进行。
d)立即将铺好ECM胶的细胞小室置于培养板中,于37℃孵育1小时,ECM胶可由液体凝成固体,吸走多余的或者未凝的胶。
3.细胞用PBS清洗一次,EDTA或者0.05%胰酶消化,然后用包含5% BSA的无血清培养基中和,1500rpm离心5-10min。
4.用无血清培养基重悬细胞,调整细胞密度至0.5-2.0 x106cell/ml。
5.取上述200 L细胞液加入小室,下室(培养板)加入900L含有10% FBS的培养基。不同规格的小室和培养板所加的体积不同,具体参考Millicell R 产品说明书以配合24孔板的8 M PET膜Millicell 悬挂式细胞培养小室(cat#MCEP24H48)为例,实验周期:3-5天
6. 37 ℃孵育24至72小时,依据肿瘤细胞类型而定。
7.孵育结束,小心取出肿瘤细胞小室,吸掉小室上层培 养液,PBS清洗一遍,70%酒精或者4%多聚甲醛固 定5min,0.5%结晶紫(2%乙醇或PBS溶解)染色 20min,然后进行第8步或者第9步。
8. PBS清洗两次以去除多余的染料,立即用棉签擦 去滤膜上层的细胞,自然静置风干。显微镜下观察 滤膜下层的细胞,随机选取不同的视野计数并算平均值。
9. 结晶紫溶解滤膜下层细胞,然后用33%醋酸脱色, 将结晶紫完全洗脱下来,洗脱液可在酶标仪上570 nm读取OD值。这种方法可以避免视野下细。
规格:   Multi-class antibodies   Anti-NDRG3  抑癌基因NDRG3抗体    0.2ml
规格:   Multi-class antibodies   Anti-NDRG4  抑癌基因NDRG4抗体    0.2ml
规格:   Multi-class antibodies   Anti-NDRG4/FITC  荧光素标记抑癌基因NDRG4抗体IgG    0.2ml
规格:   Multi-class antibodies   Anti-NDRG4/FITC  荧光素标记抑癌基因NDRG4抗体IgG    0.2ml
规格:   Multi-class antibodies   Anti-Nebulin  伴肌动蛋白抗体    0.2ml
规格:   Multi-class antibodies   Anti-Nebulin/FITC  荧光素标记伴肌动蛋白抗体IgG    0.2ml
规格:   Multi-class antibodies   Anti-Nebulin/FITC  荧光素标记伴肌动蛋白抗体IgG    0.2ml
肿瘤细胞

 

(来源:上海研生实业有限公司)

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