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细胞名称：中国科学院上海细胞库|T82 人的原粒细胞（已通过STR鉴定）
T82 人的原粒细胞| T82细胞
细胞介绍
T-47分离自一位54岁乳房侵入性导管癌的女性患者胸水。发现分化的上皮亚株(T-47D)有细胞质连接和17 雌二醇及其他类固醇降血钙素的受体。细胞表达WNT7B癌基因。
细胞特性
1） 来源：乳腺管癌
2） 形态：上皮细胞样
3） 含量： 1x106 个/mL
4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：
（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；
（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。
细胞用途：仅供科研使用。
细胞接受后的处理：
1） 收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2） 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3） 弃去T25瓶中的培养基，添加6ml新的完全培养基。
4） 如果细胞长满（80%-90%）请及时进行细胞传代。
5） 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
T82 人的原粒细胞| T82细胞培养步骤
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备RPMI-1640培养基；优质胎牛血清，10%；添加0.01mg/ml胰岛素；双抗，1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二． 细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
收到细胞后如何处理
1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与臻科生物技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。
做细胞实验的同学看过来。原装ATCC细胞现货来啦。
选择上海素冉生物细胞有3个理由：
1、细胞状态好，形态佳，易成活，是市面上比较好养的细胞之一;
2、物流迅速，复苏好后发货，次日就能到;
3、使用我司推荐的进口品牌血清进行培养实验，效果更佳。
专业技术人员李工收藏的细胞培养小技巧:
1. 买细胞要去靠谱的地方买，比如 ATCC 或者素冉生物。一般上面会有针对细胞的介绍，这样培养之前可以了解细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。
2. 不管是买的细胞，还是别人惠赠的细胞，刚拿到手赶紧的做两件事：检测是否有支原体污染;迅速扩增冻存，冻存细胞复苏后第二天蕞好更换一次培养基。
3. 发现细胞有污染迅速处理掉，特别是当你养了很多种细胞时。细菌污染、真菌污染很容易发现，支原体污染的话，细胞会长的慢，可以买个支原体检测的试剂盒定期检测一下。
4. 不同细胞生长周期不同。有的生长很快，比如说 MDA-MB-231，传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了。有的又是特别慢，比如 BT474，传代是一分二，复苏起始的时候两周多才能长满。这就需要要在培养细胞的过程中多多摸索。
5. 对于娇弱的细胞，就得细心呵护。胰酶消化不能过久，吹得时候要轻柔，离心时候也要注意转速和时间。每天都要去看一下细胞，肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。记住，是每天。
细胞培养常见问题及解决方法
问题
原因
解决方案
细胞生长缓慢
生长培养基使用不当
按照生产商的建议，使用相应的预热生长培养基。
生长培养基中血清质量差
使用其他批次血清。
传代操作不当
按照生产商的建议消化时间及传代比例进行操作。
换液过于频繁
降低换液频率，参考生产商推荐的换液频率。
细胞传代次数过多
使用传代次数较少的健康细胞。
细胞生长超过汇合状态
哺乳动物细胞传代应在细胞处于对数期、未达到汇合状态时进行，建议细胞密度达 80-90%传代。
细胞被支原体污染
将细胞、培养基和试剂丢弃；新取一只冻存细胞，并且使用新的培养基和试剂。
细胞复苏存活率低
细胞冻存不当
新取一只冻存细胞，并储存在液氮中。将细胞储存在液氮中，直至复苏。
自行制备的冻存细胞无活性
将细胞按照生产商推荐的密度冻存。
制备冻存细胞时使用传代次数少的细胞。
严格按照生产商推荐的操作程序冻存细胞。请注意本手册推荐的冷冻程序是冻存细胞的一般流程，只能作为指导原则使用。
新取一只冻存细胞。
细胞复苏方法不当
严格按照生产商推荐的操作程序复苏细胞。请注意本手册推荐的解冻程序是复苏细胞的一般流程，只能作为指导原则使用。
确保冷冻细胞解冻迅速，接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。
复苏培养基使用不当
使用生产商推荐的培养基。确保培养基使用前已经预热。
细胞稀释过度
按照生产商的建议，将解冻后的细胞高密度接种，以改善复苏效果。
处理细胞时动作不够轻柔
冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影 响。不要通过涡旋振荡或者用力敲打培养瓶的方法使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外)，也不要高速离心细胞。
冻存液中所用保护剂在储存过程中未避光
如果未避光储存，冻存保护剂会转变为对细胞有毒性的物质；新取一只冻存保护剂，重新冻存细胞。
★由于细胞库现有细胞类目多，为了不出现混乱错误，需要了解相关细胞价格及详细资料直接call，对您造成的不便还请见谅！
★注：如运输过程中导致细胞污染或者死亡，我们将无条件补发
收货后十个工作日内有其他问题提供照片可半价重发
最后，通过低温保藏储备一些细胞，以防支原体大面积来袭。如果支原体有抬头的迹象，或常规检测呈阳性结果，那么最可靠的补救措施是扔掉所有培养物，清洁培养箱和超净台，一切从头开始。当然，你得确保储备的细胞是不含支原体的。
