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Trizol 适用于从各种组织或细胞中快速分离总 RNA，既可用于小量样品（50～
100 mg 组织、5 #215;10 细胞），也可用于大量样品（ 1g 组织/ 10 细胞）。 【详细说明】
货号
产品名称
英文名称
CAS号
产品特征
R21086-100ml
Trizol(总RNA提取试剂)
Js30876-100ml
一步法总RNA提取试剂
Trizol Reagent
BR
产品简介：
Trizol(总 RNA 提取试剂)
Trizol 是一种新型的用于细胞或组织的总RNA提取试剂，Trizol采用不
Invitrogen TRIzol相似的原理和方法，其颜色、抽提的方法和步骤不后者完全相同。
Trizol 含酚和异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞或组织并且灭活核酸酶，保持
RNA 的完整性。加入氯防仿并离心后，溶液形成上清层为水相(无色)、中间层、下层为有机相(红色)。上清层用异丙醇沉淀回收总 RNA，中间层用乙醇沉淀回收 DNA，下层用异丙醇沉淀回收蛋白。
Trizol 适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA，既可用于小量样品(50～
100 mg 组织、5 10 细胞)，也可用于大量样品( 1g 组织/ 10细胞)。提取的总RNA质
量高，可用于 North6ern blot、Dot blot、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆。本产品具有以下特点：①适用范围广；②操作简单，整个过程 1 小时内完成；③
纯度高；④污染少。
产品组成：
Trizol Reagent
100ml 4℃ 避光
自备材料：
1、试剂：无水乙醇、氯防仿、异丙醇、DEPC处理水等。
2、耗材：RNase 广泛存在于人的皮肤上和体液及环境中，RNase 是导致 RNA降解的最主要物质，非常稳定。操作时应佩戴一次性口罩、手套、帽子。塑料制品、玻璃和金属物品、 实验仪器等应清除 RNase，移液器吸头、EP 管等制品的 RNase free处理尤为重要。
3、仪器：低温高速离心机、低温冰箱。
操作步骤(仅供参考)：
1、样品准备
⑴贴壁细胞：
①直接裂解：直接在培养瓶/皿中加入 Trizol 裂解细胞，每 10cm 面积加 1ml Trizol，用移液器吹打混匀。 2
②胰蛋白酶消化：用无菌 PBS 洗涤细胞后，加入含有 0.05～0.25%胰蛋白酶的 PBS 处理细胞，当细胞脱离容器壁后，加入含有血清的培养基终止反应，将细胞溶液转移至无RNase 的离心管中，5000～6000g 离心 5 min，收集细胞沉淀，去除上清。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则裂解不完全，降低 RNA收获率。
⑵悬浮细胞：无需清洗细胞，直接 5000～6000 g 离心 5 min，收集细胞。每 5 10 ～10
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动⑶物组、织植：物取和新酵鲜母动细物胞或或者每植物1组0 织或细者菌-细7胞0℃加冻入存1组m织l ，Tr5i0z～o1l0。0mg 组织在液氮中充分研
磨或者加入 1ml Trizol 研磨或者用匀浆器匀浆处理。样品体积一般不超过 Trizol体积的
10%。研磨要迅速，以 1min为佳。
⑷血液：取 0.5～1 ml 新鲜或冻存的血液，12000g 离心 5 min，去除血浆，加入 1ml Trizol， 充分振荡混匀。
2、核酸分离：充分振荡混匀(可以置于低温/超低温冰箱冻存 5～10 min 后，充分振荡，反
复 1～3 次)，将裂解样品或匀浆液室温放置 5～10 min，使核蛋白不核酸完全分离。
3、样品分层：加入 0.2 ml 氯防仿/1ml Trizol，剧烈振荡 15s，室温放置 2～3 min。置于 4℃离心机，12000 g 离心 10～15 min。上层为水相，中间层和下层为有机相，RNA在上层水相。
4、沉淀 RNA：吸取上层水相(约 500 l)转移至无 RNase 的离心管中(不要吸取任何中间层物质,否则会有染色体DNA污染)，加入等体积异丙醇混匀(或者加入1.2倍体积Trizol与用 RNA沉淀液，超低温冰箱放置 2～3hr,可以大大提高 RNA回收率），室温放置 15～20 min。12000g 4℃离心 10min，离心后管侧或管底形成胶状沉淀，弃上清。
5、洗涤 RNA：加入 1ml DEPC水配制的 75%乙醇/1ml Trizol洗涤沉淀(或者加入1ml
Trizol与用RNA洗涤液，可以大大提高RNA纯度），室温放置5～10min，7500g 4℃离心5 min，弃上清。室温干燥5～10min，不宜过分干燥，否则 RNA难以溶解。
6、溶解 RNA：加入30～50ul RNase-free ddH2O充分溶解RNA，-70℃长期保存或直接用于后续试验。对于肝、胰腺、肾等组织中 RNase 含量高的样品，沉淀时用100%去离子甲酰胺溶解。
分析与定量：
1、测定样品在 260nm 和 280nm的吸收值确定 RNA 的质量。按 1OD=40pg RNA计算
RNA的产率。OD260/280 在 1.8～2.0 视为抽提 RNA 纯度较好。浓度在 4 g/ml以上的样品适于用分光光度计测定。
2、进行甲醛变性琼脂糖电泳，确定RNA的完整性和污染情况。
3、核酸分析仪测定RNA的质量和纯度。
注意事项：
1、样品保存：加入 Trizol 混匀后，样品可在-70℃放置 1～2 月；RNA 样品可以在 70%酒精中-70℃保存 2～4 周：如果需要长期保存，应置于超低温冰箱中保存。
2、Trizol是强腐蚀性物质，污染皮肤或眼睛后，立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求 医生的帮助。
3、Trizol 可常温运输，建议保存 4℃保存。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12 个月有效。
常见问题分析：常见问题 可能原因
抽提得到的RNA沉淀未完全溶解。
水相中混有有机相，从而存在蛋白质和 DNA污染。
A260/ A280＜1.6 RNA样品用水而不是 TE溶解。低离子浓度和低 pH 条件下，A280值会偏高。样品匀浆时加的 Trizol 试剂太少，RNA 不蛋白质、DNA未能完全分离。
匀浆后样品未在室温放置或者放置时间太短，RNA不核蛋白未完全解离。
样品中含组织溶剂(如乙醇等)或碱性溶液，致水相减少或 pH升高。
DNA 污染
样品匀浆时加入的试剂体积太少。如果存在 DNA污染，可用 DNA清除剂去除。水相中混有有机相，从而存在蛋白质和 DNA污染。
RNA 产量低
RNA 降解
蛋白和多糖污染
样品裂解或匀浆处理不彻底，RNA没有被完全释放出来。得到的 RNA沉淀未完全溶解。
抽提的RNA中含有 RNase。
组织或细胞不新鲜，样品没有及时被液氮冻存，导致组织或细胞中的 RNA 降解。溶液或离心管未经 RNase free 处理，RNase 的污染导致RNA被降解。
细胞在胰蛋白酶消化时间过长，导致未加 Trizol 前 RNA已经部分降解。
电泳时使用的甲酰胺 pH小于 3.5，导致 RNA发生酸解。水相中混有有机相，从而带有蛋白质和 DNA。样品中蛋白、多糖含量高或样品量太大，细胞未裂解完全。
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