《Cancer Cell》热门解读：杀死肿瘤，可以这样做

默克化工技术（上海）有限公司

研究肿瘤发病机制，与肿瘤对抗，这场战役已经打了好几个世纪了，显然我们已经取得一些进展，但我们仍然没有完全攻克，特别是近几年来，从多学科研究，到跨学科探索，从传统探索肿瘤发病机制到关于肿瘤转移的新型代表理论“HASINI EFFECT“（哈希妮效应），从诸如PD-1/PD-L1/CTLA-4等肿瘤单抗药如火如荼的研发和上市，到CAR-T/TCR-T等新型细胞免疫疗法的广泛立项及申报到上市，从初期昂贵的新型药物到来自社会普遍关注下的纳入医保，在克服肿瘤的路上，我们有理由相信，治愈肿瘤，未来可期。

两篇Cancel Cell文章解读：

Cancer Cell（IF:23.916）

在人乳腺癌中成纤维细胞异质性与免疫抑制环境

In Brief：

Costa等研究人员确定了四种乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)亚型。CAF-S1促进一个免疫抑制微环境通过招募CD4+CD25+ T细胞分泌CXCL12，促进其生长分化到treg和生存，通过表达T细胞相互作用的蛋白。

乳腺癌组织中发现4种CAF细胞亚型

CAF-S1与免疫抑制微环境显著相关

CAF-S1细胞能通过表达OX40L,PD-L2和JAM2招募和保持（CD4+CD25+）T细胞活性

CAF-S1细胞能够通过B2H7，DPP4和CD73促进T淋巴细胞（CD4+FOXP3+）的增殖

在人乳腺癌组织中发现并确认存在4种CAF亚型

重新确定了4种CAF亚型的空间分布

CAF-S1在乳腺癌组织中的富集是与FOXP3+T淋巴细胞的增多紧密关联的

CAF-S1和CAF-S4的分子特征

CAF-S1能够增强对CD4+CD25+T淋巴细胞的招募和保持

CAF-S1能够增强Tregs细胞的分化及活性，然而CAF-S4并没有表现出这些属性

STARMETHOD（超级ELISA-Milliplex 多因子 panel）

入组样本筛选（患者平均年龄，诊断/组织学分级、病理肿瘤大小、病理在诊断时确定淋巴结状态、病理转移状态、指示BC亚型和肿瘤大小。）该研究实验设计使用了前瞻性队列研究（入组样本均为未经任何治疗的BC组织和BC癌旁组织，包含Lum和TNBC两种亚群）和回顾性队列研究（主要通过IHC验证了包含60例和272例的手术切除组织，该队列分析包含了LumA，HER2和TNBC三个亚群）。

图1, CAF亚群与细胞因子的聚类分析，BC细胞培养上清（n=36）,分析发现CAF-S1亚群与以上细胞因子相关性显著。

上图细胞因子列表为文中所选用的细胞因子联检试剂盒（25µL样本同时检测几十种指标）

面临越来越多的PD-L1单抗药的开发与上市，不容忽视的耐药性问题可能正是由于在免疫检查点中大多数是PD-1/PD-L1的结合形式发生和存在的，PD-L2可能产生的耐药性问题并不明确。相对传统的免疫疗法，靶向CAF-S1可能是一个有希望的作为补充治疗的新型免疫疗法。

参考文献

1，Ali, H.R., Provenzano, E., Dawson, S.J., Blows, F.M., Liu, B., Shah, M., Earl,H.M., Poole, C.J., Hiller, L., Dunn, J.A., et al. (2014). Association between CD8+ T-cell infiltration and breast cancer survival in 12,439 patients. Ann.Oncol. 25, 1536–1543.

2，Allinen, M., Beroukhim, R., Cai, L., Brennan, C., Lahti-Domenici, J., Huang, H.,Porter, D., Hu, M., Chin, L., Richardson, A., et al. (2004). Molecular characterization of the tumor microenvironment in breast cancer. Cancer Cell 6, 17–32.

3，Ariga, N., Sato, E., Ohuchi, N., Nagura, H., and Ohtani, H. (2001). Stromal expression of fibroblast activation protein/seprase, a cell membrane serine proteinase and gelatinase, is associated with longer survival in patients with invasive ductal carcinoma of breast. Int. J. Cancer 95, 67–72.

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超级ELISA   肿瘤免疫治疗

最 新研究表明：

经CD40配体修饰的CAR-T 细胞可通过诱导内源性抗肿瘤反应来增强抗肿瘤功能。

嵌合抗原受体(CAR) T细胞是治疗B细胞恶性肿瘤的有效细胞。然而,改善 CAR-T细胞治疗仍然需要。在这里，我们设计了肿瘤靶向的CAR-T细胞，使其具有本构性表达探讨免疫刺激分子CD40配体(CD40L)在不同小鼠白血病中的作用淋巴瘤的模型。我们观察到CD40L+ CAR-T细胞通过抗原绕过肿瘤免疫逃逸通过CD40/ cd40l介导的细胞毒性损失和诱导持续的内源性免疫响应。过继细胞移植后，CD40L+ CAR-T细胞表现出较好的抗T活性。

CD40+CAR-T细胞能够通过CD40/CD40L结合杀伤抗原阴性肿瘤细胞

CD40+CAR-T细胞能够通过CD40/CD40L结合杀伤抗原阴性肿瘤细胞

CD40+CAR-T细胞相比第二代CAR-T细胞能够显著提升抗肿瘤反应 

CD40+CAR-T细胞激活APCs辅助提升抗肿瘤反应

激活APCs主动识别非CAR-T细胞来识别肿瘤细胞并增强抗肿瘤反应

CD40/CD40L介导细胞毒性通过m1928z-CD40L CAR-T细胞减少抗原阴性肿瘤细胞增殖

m1928z-CD40L CAR-T细胞不依赖预调节即可发挥体内有效功能

对于肿瘤细胞，相对于m1928z CAR-T细胞，m1928z-CD40L CAR-T细胞抗肿瘤效应明显有所改善

对于CD40+淋巴细胞和DC细胞，CD40L改良型CAR-T细胞提升共刺激分子表达上调

m1928z-CD40L CAR-T细胞激活体内APCs

肿瘤组织和脾 脏中，m1928z-CD40L CAR-T细胞治疗显著增强了免疫效应因子的聚集

m1928z-CD40L CAR-T细胞通过CD40/CD40L结合诱导DCs的激活和增殖

m1928z-CD40L CAR-T细胞产生更多的体内效应细胞因子和增强效应功能，相较于内源性非CAR-T细胞

STARMETHOD（超级ELISA-Milliplex 多因子 panel）

体外分泌细胞因子分析（MILLIPLEX MAP Mouse Cytokine/Chemokine, Premixed 13 Plex kit ）：

CAR-T细胞和A20肿瘤细胞共培养，检测细胞培养上清

CAR-T细胞和BMDC（IL-12P70诱导的骨 髓来源树突状细胞）共培养，检测细胞培养上清

血清细胞因子分析（MILLIPLEX MAP Mouse Cytokine/Chemokine, Premixed 13 Plex kit ）：

体外B/T细胞共培养

脾 脏原代分离的野生型B细胞和反转录病毒转导的T细胞共培养，检测培养上清（Milliplex Mouse TH17 Assay, MTH17MAG-47K）

体外CAR-T细胞和BMDC共培养

CAR-T细胞和BMDC（GM-CSF诱导的骨 髓来源树突状细胞）共培养，检测细胞培养上清（Milliplex Mouse TH17 Assay, MTH17MAG-47K）

图2 通过milliplex检测A20肿瘤细胞和经CAR-T细胞治疗后的3～7天细胞因子的变化

上图细胞因子列表为文中所选用的细胞因子联检试剂盒（25µL样本同时检测几十种指标）

从免疫治疗的角度来看，目标是在抗肿瘤过程中尽可能地增强免疫效应。实验结果验证了CD40L+ CAR-T细胞通过激活免疫系统的先天和适应性分子，以协调持续的内源性抗肿瘤反应，从而产生更强的抗肿瘤作用。我们相信结合CAR的高细胞毒性效应，通过CD40L共刺激分子作用于T细胞提供激活DCs的策略，招募和增强肿瘤特异性T细胞和过继性CAR-T细胞的细胞毒性。该项研究目前正在测试 CD40L+ CAR T细胞在临床前实体瘤模型和为临床下一代抗cd19 CAR T细胞的制备疗法做准备。

参考文献

1，Avanzi, M.P., Yeku, O., Li, X., Wijewarnasuriya, D.P., van Leeuwen, D.G.,Cheung, K., Park, H., Purdon, T.J., Daniyan, A.F., Spitzer, M.H., et al. (2018).Engineered tumor-targeted T cells mediate enhanced anti-tumor efficacy both directly and through activation of the endogenous immune system. Cell Rep. 23, 2130–2141.

2，Banchereau, J., and Steinman, R.M. (1998). Dendritic cells and the control of immunity. Nature 392, 245–252.

3，Barbier, L., Tay, S.S., McGuffog, C., Triccas, J.A., McCaughan, G.W., Bowen,D.G., and Bertolino, P. (2012). Two lymph nodes draining the mouse liver are the preferential site of DC migration and T cell activation. J. Hepatol. 57,352–358.