台式扫描电镜在肾活检检测中的应用新进展

天美（中国）科学仪器有限公司

      对于肾脏疾病的研究，除了常规的肾脏疾病的诊断外，组织病理学诊断已经广泛应用。被我们所熟知的是TEM（透射电镜）在肾组织检测中的广泛应用，由于样本制备的复杂性以及受组织表面图像信息的限制，扫描电镜(SEM)在肾活检检测中的应用仍未得到广泛的探索。随着台式低真空扫描电子显微镜(LV-SEM)发展，利用其比光镜的放大倍数和分辨率高得多的特点，研究者发现了一种新的观察方法。LV-SEM可直接观察普通的光镜标本无需进一步制样处理，同时可根据光镜样本的厚度，为在三维水平上进行组织病理学检测提供可能。应用LV-SEM检测方法，有望提高病理诊断的质量。

      日立台式扫描电镜体积小，操作方便，不受暗室要求，具有很高的实用性。Tottori大学医学院解剖学系的Sumire Inaga博士注意到其低真空特性，用背散射电子直接观察没有覆盖盖玻片的染色组织，得到了SEM图像。

       结合常规的PASM-HE染色方法，同时Tottori大学的Sumire Inaga博士发明了用铂进行重金属染色的方法—她称之为“铂蓝”染色法—并证明了这种方法能够有效地观察细胞成分。铂蓝具有细胞组织特异性和有效增强背散射电子信号的特点，便于LV-SEM观察石蜡包埋组织切片。在玻片上未染色的薄石蜡切片脱蜡后，用铂蓝溶液进行染色，结果在LV-SEM观察中清晰地显示了光镜标本的细胞结构。这样，铂蓝染色的图像可以清晰地显示细胞成分和其他成分，而钝化的图像可以清晰地显示银阳性的基底膜和其他成分。这些染色特征是互补的。通过连续切片PASM染色和platin-blue染色标本的石蜡包埋组织，结合两者的LV-SEM图像，可以对同一位置组织病变的超细结构图像进行严密的检测（图1）。

       薄基底膜病是一种遗传性疾病，构成基底膜的IV型胶原发生遗传异常，导致肾小球基底膜变薄，临床上以持续血尿为特征。将LV-SEM应用于经遗传检查、免疫染色、TEM证实的薄基膜病变的标本上，观察到整个肾小球基底膜上的小裂缝和气孔，表明它们与血尿有很强的相关性(图2)。

IgA肾病是一种在日本和亚洲发病率较高的肾脏疾病。它的特点是IgA沉积，IgA是一种存在于肾小球中的免疫球蛋白，通常见于血尿的临床病例。许多国家关于其病因和相关病理、治疗方法

图1PASE染色（左）与铂蓝染色（右）SEM对比图

图2薄基底膜病变的肾小球SEM图

和预后的研究文献很多，但涉及的机制的关键方面仍不清楚。许多病例的透射电镜检查报告表明，基底膜经常变薄，少数证实基底膜有微小破裂，红细胞从破裂处渗漏，但它们与血尿的共同联系仍有待阐明。因此，我们开发了一种新的肾小球基底膜研究方法，对确诊的IgA肾病病例的荧光染色标本进行PASM染色，通常需要荧光证据进行诊断。这些PASM染色标本由LV-SEM检测。由此产生的LV-SEM三维图像在IgA肾病(图3)的肾小球基底膜上清楚地显示出小的裂隙和孔的形成(图3)，清楚的表明在脆弱的基底膜中形成大量的小破裂是血尿的原因。

图3IgA肾病肾小球图

LV-SEM可有效观察肾活检的光镜标本和任何其他组织的染色选择。它的应用很可能扩展到常规透射电子显微镜无法进行组织检查，在常规光镜检查难以诊断的肿瘤以及许多需要超显微信息的情况下。随着LV-SEM的广泛应用，除了铂蓝染色和PASM银染色外，新的染色技术也将出现，并将应用于细胞病理学诊断、快速分析以满足迫切需要这将是提高病理组织诊断准确性的重要贡献。

（来源：天美（中国）科学仪器有限公司）