AAV

AAV-TBG-Cre/GOI系统简介：

l AAV-TBG-Cre系统是整合了肝脏特异性TBG启动子和Cre重组酶的腺相关病毒载体。

Ø TBG启动子是一种基于人甲状腺结合球蛋白(TBG)启动子和微球蛋白增强子的混合型启动子，用于肝脏特异性转外源基因表达。

Ø Cre重组酶是在P1噬菌体中发现的一种重组酶，具有催化活性，而且与限制酶相似，能识别特异的DNA序列，即LoxP位点。Cre重组酶作用于同一DNA链上两个同方向的LoxP位点时，可以有效删除两个LoxP位点之间的碱基序列，达到重组靶DNA链的目的。

Ø AAV8-TBG-Cre腺相关病毒可高效快速感染小鼠肝脏，目前被认为是最特异的肝实质细胞示踪工具。

l 此外，本公司还提供靶基因的病毒定制服务AAV8-TBG-GOI（Gene of Interest），实现外源基因在肝实质细胞中快速特异表达。

AAV-TBG-Cre/GOI的显著特点：

l 最短时间完成――仅需1-2周
l 最高效率保障――高达100%
l 最低成本实现――低于KI/KO

原理 数据：

ROSA26-loxP-Stop-loxP-YFP小鼠尾静脉分别注射1×1011 对照病毒AAV8-TBG-Blank（Control）和1×1011 AAV8-TBG-Cre病毒，一周后肝脏切片免疫组化检测YFP表达，结果显示 90%肝细胞表达YFP。

AAV-TBG-Cre/GOI相关产品 服务：

AAV-TBG-Cre/GOI应用优势：

l 完胜基于白蛋白启动子的肝细胞特异性表达调控

表1.Alb和TBG启动子的文献数据比较

Alb-Cre，由于发育中肝前体细胞中有短时转录活性，其中一部分细胞可分化为胆管上皮细胞，导致部分胆管上皮细胞非特异性表现。

TBG-Cre，只在成熟肝实质细胞中表达Cre，目前被认为是肝细胞特异性敲除的金标准。

Alb-CreERT，除了在肝前体细胞内的短时转录活性外，诱导剂他莫昔芬有一定肝毒性，可引起肝细胞发生胆管反应，降低肝细胞特异性。

l 远超慢病毒和腺病毒的超高肝脏感染效率

表2. 三种病毒的参数比较

低免疫原性

不整合至宿主基因组，不会诱发基因失活或激活癌基因

高免疫原性

不整合至宿主基因组，不会诱发基因失活或激活癌基因

低免疫原性

随机整合，可能导致宿主细胞基因失活或癌基因被激活

l 力克基因打靶技术的时间成本和技术难题

表3. AAV肝脏特异性和KO/KI小鼠比较

1. 通过常规基因打靶技术获得cKI/KO小鼠

2. AAV-TBG-Cre病毒现货

3. 尾静脉注射

4. 开展下游实验研究

1. 基因载体构建（复杂，工作量大）

2. 胚胎干细胞获得

3. 同源重组，筛选阳性胚胎干细胞

4. 移植阳性胚胎干细胞至受体胚胎，得嵌合体小鼠

5. 至少经过两代遗传获得纯合体小鼠

6. 与Alb-Cre或Alb-CreERT小鼠杂交，得杂合小鼠

7. 筛选鉴定，待小鼠成年，开展下游研究

1个月获得AAV-TBG-GOI病毒，尾静脉注射后1-2周肝脏特异表达，即可开始下游实验。

1-2周即可开始下游实验

从Alb-Cre小鼠和cKI/KO小鼠杂交计算，至少需要2个月。

模型一旦构建，基因敲入/敲除立即生效，所有细胞均一化，无法控制数量和比例。