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穿刺接种是把菌种接种到固体深层培养基中的方法，也叫穿刺培养。穿刺接种法此法用于嫌气性细菌接种或为鉴定细菌时观察生理性能用。
在进行穿刺接种时，用接种针（尖部挺直的）蘸取少量菌苔，自固体深层培养基表面的中心点垂直穿刺，直到培养基底部，然后轻轻退出，保持接种线整齐。接种完毕后，静置培养，然后可根据穿刺部分菌落的生长和扩散状况来判断该微生物的运动性能和对氧气的需求状况。
要保证接种成功，必须具备两个前提条件。一是要使接种能在无菌的环境中进行，即须在灭 过菌的无菌室或接种箱中进行；而且操作者必须用肥皂洗手，须穿着干净整洁的衣服，最好 配戴口罩；接种用的各种用具也应经过灭菌。二是要使被接种的培养基完全无菌，即必须将 培养基灭菌后方能用于接种。
1)将菌种和培养基的两只试管平行放在左手上，用拇指与其它四指夹住，并使中指位于两试管之间，两试管的管口齐平。
2)用右手先将棉塞拧转松动，并稍拉出一些，以利接种时拔出
3)右手拿接种针在火焰上将针端灼烧灭菌接着把在穿刺中可能伸入试管的其他部位，也灼烧灭菌；
4)用右手的小指和手掌边拔出棉塞。接种针先在培养基部分冷却，再用接种针的针尖沾 取少量菌种。
5)接种有两种手持操作法。一种是水平法，它类似于斜面接种法。一种则称垂直法，如图 2-14 所示。尽管穿刺时手持方法不同，但穿刺时所用接种针都必须挺直，将接种针自培养 基中心垂直地刺入培养基中。穿刺时要做到手稳、动作轻巧快速，并且要将接种针穿刺到接 近试管的底部，然后沿着接种线将针拔出。最后，塞上棉塞，再将接种针上残留的菌在火焰 上烧掉。
6)将接种过的试管直立于试管架上，放在37或28恒温箱中培养。24h 后观察结果(注 意：若具有运动能力的细菌，它能沿着接种线向外运动而弥散，故形成的穿刺线较粗而散、 反之则细而密)。微生物的接种 要开展微生物的培养观察活动，就必须有菌种。对初次接触微生物的中学生来说，菌种 可以从科研部门、生产单位得到。然而，要想将所得到菌种进行培养和长期保留，就必须学 会接种技术，以使菌种能够“传宗接代”。
1、斜面接种
是从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一支新鲜斜面培养基上的一种接种方法。
操作步骤如下：
首先，点燃酒精灯。将菌种和斜面培养基的两只试管平行放在左手上，用拇指与其它四指夹住，并使中指位于两试管之间，两试管的管口齐平。
其次，用右手先将棉塞拧转松动，并稍拉出一些，以利接种时拔出。
第三，右手持接种针，在酒精灯将针头部分烧红灭菌。针头以上凡是接种时可 能进入试管的部分，均应用火灼烧。以下操作都要使试管口靠近火旁。
第四，用右手的小指与掌间拔掉左手上两只试管上的棉塞，同时迅速将试管口在酒精灯上烧 秒钟左右，使管口上可能沾染的少量杂菌得以烧死。
第五，将烧过的接种针伸 入菌种管内，先将针头接触培养基上没有菌的部位（如斜面的顶端），使其冷却，以免烫死 被接种的菌体。然后轻轻接触菌体，取出少许，慢慢将接种针抽出试管，接种针抽出时不要 使针头部分碰到管壁和管口，取出后，不可使针头通过火焰，更不可触及其它无关物品或桌 面。
第六，迅速将接种针伸进另一试管，在培养基上轻轻划线，接种菌体于其上。划线时，要由 底部起划较密的平行线，一直划到顶部，以充分利用斜面面积，但不要将培养基划破。
第七，烧灼试管口，将棉塞塞上。塞棉塞时，不要移动试管迎接棉塞，以免试管在移动中纳 入可能含菌的空气。 第八，将针头在火焰上烧灼灭菌。放回原处后，腾出手将棉塞塞紧。
2、液体培养基接种法：
一种由斜面菌种接种到液体培养基中的方法。接种方法与斜面接种法相同，但手持试管时，应使试管略向上斜，以免培养基流出。
将带有菌种的接种针送入液体培养基时，可使针头部分在液体表面与管壁接触的部位轻轻摩擦。接种后，塞上棉塞，烧灼接种针。最后将试管在手掌上轻轻打动，使菌体在培养基中均匀散开。
