悬浮培养的细胞一般为淋巴细胞或血液系统来源的细胞(如人胃癌细胞SNU-5,小鼠白血病细胞WEHI-3, 人白血病细胞K-562, HL-60),这种细胞体积小,它们天生就生活在悬液(血液)中。由于缺乏黏附分子的表达,在培养基中呈现悬浮状态,细胞大体呈球形或椭球型。
图为K-562细胞,来源于ATCC
关于悬浮 de 传代
1. 悬浮细胞无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离,整个过程较为迅速,对细胞的损伤也较小。通常有两种方法:
2. 至于何时传代,最准确的是根据细胞密度来确定。传代最大细胞密度随细胞系不同而有所差异,ATCC细胞库里提供的细胞培养信息,里面有培养条件选项,会详细说明细胞的接种密度和培养密度,有的还有图片或参考产品使用手册。
如何有效去除死细胞?
细胞复苏或培养过程中常会出现死细胞和细胞碎片,可通过低速离心的方法去除死细胞或细胞碎片,死亡细胞的碎片会留在上清中,即可除去。不同细胞离心力可能不一样,可以先试一下300 g~500 g这个离心力,如果能离下大部分细胞就行,如果一点细胞都离不下来就适当加大离心力和时间。
BI教您做好悬浮细胞的冻存和复苏 悬浮细胞的冻存和复苏与贴壁细胞基本一致:1. 冻存
我们推荐使用BI的无血清冻存液,直接按以下步骤进行,操作更加方便,平均活细胞回收比例超过90%:
用BI无血清冻存液将细胞重悬(不需回温),将细胞密度调整为3~5x106 cells/ml,添加到冻存管中(一般每管1ml)。
建议将含有细胞悬液的冻存管放入程序降温盒或是保温杯中,置于-80 C冰箱6小时以上或是过夜(或不需要程序降温)。
将细胞冻存管由液态氮气相中取出,置于室温回温,不用水浴溶解。此时可准备新鲜培养基、无菌15ml离心管、培养瓶。
先在无菌15ml离心管中加入5ml培养基,再将化冻的细胞悬液加入离心管中。以200 g~300 g,3分钟离心收集细胞。