手机版|
二维码|
MCE 重组蛋白表达体系主要有：大肠杆菌，酵母细胞，昆虫细胞和哺乳动物
细胞。
2．重组蛋白纯度和浓度测定
重组蛋白纯度测定方法：a. SDS-PAGE 测定法；b. HPLC 测定法；c. 银染测
定法。
重组蛋白浓度测定方法：a. Bradford 蛋白定量测定法；b. BCA 蛋白定量测
定法；c. SDS-PAGE 蛋白定量测定法。
3．重组蛋白表达体系对比
哺乳动物细胞 结构与天然蛋白最接近，完善的翻译后加工，活性更好，但表达水平较低，周期长，技术要求高
酵母细胞 易操作，蛋白背景弱，适合大规模生产，便于纯化，但存在产量不高以及糖基化达不到要求等问题
昆虫细胞 功能与天然蛋白相似，对于部分有毒性或较难表达蛋白有优势，但糖基化程度低，形式比较单一，活性不如哺乳动物细胞表达系统
纯度 95%，浓度通常在 10 mg/mL 2/3 是原核表达体系，1/3 是昆虫细胞表达体系与哺乳动物细胞表达体系
为防止冻干粉产品的粉末沾在管壁或管盖上，使用前请勿开盖，离心(约
13000 rpm)处理 20-30 秒，使附于管盖或管壁的蛋白收集于管底。MCE 保
证每管产品的蛋白总量达到标示含量。
6．重组蛋白复溶
a. 使用前先离心(约 13000 rpm)处理 20-30 秒，使附于管盖或管壁的蛋白
收集于管底。
b. 严格依据说明书，使用推荐的溶液将蛋白冻干粉溶解至推荐的浓度。大
多数重组蛋白建议溶解在灭菌超纯水中，浓度不低于 100 g/mL，以便于
后续进一步稀释至工作浓度。
c. 用移液枪轻吹混匀，或将管盖盖好后轻柔颠倒数次进行混匀，低速离心
数秒。
d. 复溶后的重组蛋白在室温放置数分钟，以保证蛋白能够充分溶解。
7.重组蛋白储存
由于每次冻融都会造成蛋白的部分变性，因此建议客户收到产品后适量分
装避免反复冻融。
a. 短期储存：
冻干粉状态产品在室温下存放 3 周，不影响活性。
复溶后的产品在 4℃ 可稳定储存 1-2 周。
b. 长期储存：
冻干粉状态产品在 -20℃ 下，可稳定保存至少一年；推荐 -80℃ 长期保存，
以获得更稳定性能的产品。
可选择包含一定浓度载体蛋白(0.1% BSA， 5% HSA， 10% FBS，或 5% 海
藻糖)的溶液或培养基复溶产品，分装后冻存于 -20℃ 下，可保存至少三个
月；推荐 -80℃ 长期保存，以获得更稳定性能的产品。
注：分装冻存时，蛋白浓度不低于 100 ng/ L，且每管的体积不可小于 20
L。
8.重组蛋白标签影响
蛋白标签指重组蛋白制备过程中与目的蛋白融合表达的蛋白或多肽。MCE
的重组蛋白产品大部分为无标签状态，但少数重组蛋白产品因为不同目的
需要加有标签。
a. 标签利于蛋白纯化。
b. 当目的蛋白无特定抗体直接鉴定，可利用标签进行 Western Blot 或
ELISA 分析方法鉴定。
c. Fc 标签可以提升重组蛋白的半衰期以提高分子的稳定性，同时也能够促
进重组蛋白形成活性二聚体。
重组蛋白标签对蛋白的生物学活性影响存在未知结论，但对大部分检测应
用中，重组蛋白的标签对蛋白本身生物学活性并无影响，所以无需移除。
MCE 对重组蛋白产品都已经做过生物学活性检测并将数据公示于 COA 中。
9. 重组蛋白活力值与计算方法
MCE 重组蛋白的生物学活性 (ED50) 测定数据在 COA 中可以获得。ED50 是
Effective Dose 50 的缩写，是可诱导 50% 最大反应的蛋白浓度 (ng/mL)。
计算公式如下:
MCE 的重组蛋白产品并未采用 WHO (National Institute for Biological
Standards and Control) 设定的标准来测定活力值，以上计算公式并不适
用于 International Units 和 ED50 的转换关系，需要采用国际标准品
对比相同实验获得该重组蛋白的 IU 值。
10. 重组蛋白 ED50 值的批间差
不同批次的产品或不同实验方法的测定都会导致重组蛋白产品的 ED50 值变
化，我们推荐客户根据自己的实验测定得到最合适的实际 ED50 值。
11. 重组蛋白应用方案
MCE 重组蛋白产品的 COA 中显示的实验方案只是确认该产品的 ED50 值，
但并不与终端客户的不同类型实验结果存在等效性。如果客户需要应用在
不同于本公司产品测试的实验方法时，我们建议客户通过实际测试获得最
佳 ED50 值。
12.重组蛋白的种属交叉活性
重组蛋白的种属交叉活性需要根据具体产品而定；建议尽量选择对应种属
的重组蛋白。如实在无法匹配种属，以下信息供参考：
a. 大多数人细胞因子对小鼠细胞有效 (仅少数例外)。
b. 多数小鼠细胞因子对人细胞有效，但特异性可能不强。如小鼠的表皮生
长因子(EGF)对人的表皮细胞有活性，对人的其他种类细胞可能也有作用。
c. 干扰素、GM-CSF、IL-3、IL-4 具有种属特异性，即重组人的这些细胞因
子只能作用于人细胞，对小鼠和大鼠等其他种而重组小鼠的这些细胞因子
也仅用于小鼠，对人的细胞无效。
d. 成纤维细胞生长因子 (FGFs)、神经营养素 ( Neurotrophins，如 BDNGF、
GDNF、CNTF、 -NGF 等)、TGF- 等高度保守，各种属间交叉活性强。
