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增强型RIPA裂解液使用说明书——中国生物器材网

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放大字体  缩小字体    发布日期:2019-06-25  来源:仪器信息网  作者:Mr liao  浏览次数:798

1.  贴壁细胞,细胞刮刮下细胞,计数,并收集5 106 个细胞,600g 离心5分钟,尽量吸尽上清,用预冷的PBS重悬细胞,600g 离心5分钟收集细胞,尽量吸尽上清,加入0.5ml的预冷的裂解液,用移液器吹打数下,冰上孵育30分钟, 10000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。

注意:可以直接将裂解液加入培养细胞的器皿中裂解细胞,具体操作如下,

A.用移液枪小心吸去培养液,

B.加入适量的预冷的PBS,

C.用移液枪小心吸去PBS,

D.按照下表加入裂解液,冰上孵育30分钟。

E.将裂解液转入离心管中, 10000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。



2.悬浮细胞,计数,并收集5 106 个细胞,600g 离心5分钟,尽量吸尽上清,用预冷的PBS重悬细胞,600g 离心5分钟收集细胞,尽量吸尽上清,加入0.5ml的预冷的裂解液,用移液器吹打数下,冰上孵育30分钟, 10000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。

对于组织:

注意:取适当量的裂解液,放与4℃预冷,使用前数分钟内需加入酶抑制剂。

1. 手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中,漂洗数次,洗净组织血迹,用滤纸吸干组织表面液体,将组织切成几个较小的组织块。

2. 称量组织,按组织净重(g):裂解液(ml)=1:10的比例,加入相应体积的裂解液进行匀浆 ,(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。

3. 匀浆器匀浆,肉眼观察无明显组织块,冰上孵育30分钟。

4. 10000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。

 

结果实例: 

   M        N                M         N                 M         N 

      

          DSG3                     HSP90                      PCNA

M:Hela Cells  N:A549 Cells

如图:增强型RIPA裂解液提取细胞蛋白,BCA测定蛋白浓度,上样20ug,电泳,转膜,孵育博士德一抗,应用博士德ECL发光液显色。

故障排除:

 
 
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