用电热恒温培养箱进行巧克力琼脂培养基生长试

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用电热恒温培养箱进行巧克力琼脂培养基生长试

日期：2019-04-08 / 人气：

用电热恒温培养箱进行巧克力琼脂培养基生长试验
1.无菌操作要求     培养基生长试验应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。稀释液、培养基、实验器具等灭菌时，应按照中华人民共和国药典中灭菌法的要求，采用验证合格的灭菌程序灭菌。 2.菌种复苏     启开流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌菌种，用0.9%无菌氯化钠溶液0.3mL制成菌悬液，加至巧克力琼脂斜面培养基中，36℃ 1℃培养18h~24h。 3.菌种传代     取1mL上述复苏后的流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌新鲜培养物，加至巧克力琼脂斜面培养基中，在电热恒温培养箱36℃ 1℃中培养18h~24h。 4.菌种增菌培养     接种上述传代后的流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌的新鲜培养物至巧克力琼脂斜面培养基中，在电热恒温培养箱36℃ 1℃中培养18h~24h。 5.菌悬液制备     将上述增菌培养后的流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌的新鲜培养物分别用0.9%无菌氯化钠溶液稀释， 经比浊后制成每1mL含菌数约相当于100cfu~1000cfu的菌悬液。 6.培养基接种     用蒸馏水或去离子水按说明上的浓度配制待检巧克力琼脂培养基基础， 121℃高压灭菌15min后，冷却至45℃~50℃左右， 加人7%~10%无菌脱纤维兔血或马血， 混匀， 置于85℃水浴中10min~15min加热， 在加热过程中应轻轻摇动， 使血液的色泽由鲜红色变成巧克力色， 冷却至50℃左右， 迅速在每个平皿(直径为90mm)中加入约15mL~20mL，待冷却至室温凝固后进行检测。     检测时，每个平皿加入0.1mL上述菌悬液。每种质控菌株接种2个平皿，并用1个未接种的培养基平皿做空白对照。置36℃ 1℃电热恒温培养箱中，流感嗜血杆菌培养18h~24h，置36℃ 1℃在5%~8%COz环境中， 脑膜炎奈瑟菌培养18h~24h。观察菌落生长情况， 并记录结果。

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