受激损耗显微镜、基态损耗(GSD)和饱和结构照明技术都基于非线性光学技术,需要应用多个高强度脉冲激光,利用特定调制滤波器控制激发光束的几何形状(被称为点扩散函数工程学)。STED设备利用光栅扫描成像,与单光子共聚焦显微镜相似。与之对比,随机光学重建显微镜(STED)是一种单分子成像方法,它凭借整个分子群体中少数分子的激活,依次成像,实现单个发射分子的定位。这个教程展示了STED和STORM技术的异同。
教程中,两个虚拟细胞在窗口分别显示了细胞核(深灰色)和周围的细胞质(浅灰色)。细胞中的光转换荧光基团好似绿色的小星球。操作时,请点击Auto按钮和调整速度控制按钮。当STED细胞被激发激光、损耗激光一同扫描时,STORM细胞中的荧光分子被依次光活化、定位和光漂白。请注意STED是一个扫描技术,而STORM随机为少数单个分子成像。