上海光学仪器厂:免疫染色法了解细胞内胞器分布情形!

研究过程与方法
 
实验首先利用免疫染色法了解细胞内胞器的分布情形。免疫染色是利用抗原及抗体之间的专一结合特性，使抗体跟抗原结合，若将萤光物质标定在抗体上，即可以利用萤光显微镜观察抗原所在的位置。配合其他已知的标定分子（如DNA位在细胞核，Golgin-245蛋白质位在高基氏体）我们可顺利观察实验中蛋白质所在的胞器位置，探讨蛋白质在细胞内的运输情形。

实验是以萤光标定的霍乱毒素次单元B（CTB-594nm）及运铁蛋白质（Tf-488nm），了解细胞外的分子是透过内胞作用由细胞膜运送到高基氏体。此二种蛋白质的不同之处是运铁蛋白质的胞饮作用需透过包涵素外衣囊袋（clathrin）的三角架结构运送，而霍乱毒素次单元则大都不需透过包涵素外衣囊袋运送。实验过程中，直接加入萤光标定的霍乱毒素次单元B及运铁蛋白质，皆会受细胞自动胞饮进入细胞，我们只需控制蛋白质运输过程的时间即可观察到这些蛋白质会被运送到所预期的标的地（例如：endosome、Golgi、ER）。

实验是利用细胞转染的方法，将外源基因送至细胞中，使细胞表现该基因。常用的细胞转染法有磷酸钙、电穿孔法、脂小体和显微注射等。此次实验是以脂小体为媒介将ARL1的突变株ARL1QL及VSVG-GFP转染到细胞内。将VSVG-GFP质体转至细胞内则该外生性VSVG-GFP会运送至高基氏体后，再运送到细胞膜，因此透过VSVG-GFP这种毒蛋白质可以了解外释作用。而我们同时送入的是一种会参与调控囊泡运输的特殊蛋白质分子ARL1QL，观察ARL1QL对于VSVG-GFP运输过程的调节作用。