在荧光显微镜下观察尺寸小于光学极限物体

在荧光显微镜下观察尺寸小于光学极限物体

由于观察细胞影像必须透过显微镜等硬体，一旦讯号透过光学系统，必然会有讯号遭到扭曲或损失，
此过程称为convolution。若能知道点光源在光学系统下被扭曲的状况，便可用数学方式将模糊的xyz讯号还原并组成完整影像，
此过程称为Deconvolution。

至于影像被显微镜convolution成什么样子呢？只要在荧光显微镜下观察尺寸小于光学极限的荧光珠子(约50~200  nm)，
则每颗珠子可视为一点光源，其经过显微镜发散后得到的影像称为PSF  (point  spread  function)。PSF是一个3D函数，
描述的是点光源在xyz轴上被模糊的情形，而一个生物样品的讯号又可视为许多个点光源的PSF的集合。
根据上述，以PSF为基础，将影像进行Deconvolution后，不仅能增加讯号强度，也能改善讯杂比、提高对比及解析度。

目前市面上已有以Deconvolution为基础的高阶影像系统，除了使用Deconvolution技术，系统也可搭配其他硬体，
包含使用CCD快速的撷取影像、能减少光对活细胞样品的伤害的光源、精準的全自动化xyz载物台等，可以简易得到清晰的活细胞影像。
这些先进的影像系统，还可以全自动进行多色观察、时序拍摄、自动对焦、多点拍摄、细胞追踪，
亦可依需求加装雷射进行photoactivation、FRET、FRAP、TIRF等实验，为活细胞影像研究领域提供了完整且便利的先进工具。