研究细胞的立体结构的试验方法和步骤

研究细胞的立体结构的试验方法和步骤-生物显微镜常识

几种常用的离析方法和离析材料永久制片方法

前言：
（用化学药品或酶把细胞间的物质溶解，使细胞分离的方法称为离析法。
这种方法便于研究细胞的立体结构。经分离的材料，可作临时观察，
也可制成永久制片）

生物材料的离析方法

  1.铬酸---硝酸离析法此法适用于木质化组织，如木材、纤
维和硬化细胞等。离析液是等量10%铬酸与10%硝酸混合液。方
法是先将材料切成火柴梗粗细、长约1厘米的小条，放入广口瓶
中，然后加入离析液，其量约为材料的20倍，置于30一  40 0C温箱
中直至材料分离为止。此时可用水洗净材料并保存于70%酒精
中。
  2.盐酸---草酸按离析法盐酸一草酸钱离析法较缓和，适用
于叶肉组织、髓和其他薄壁细胞的离析。其方法是先把材料切成小
块，放于3，1的70%酒精和蘸薰仁酸混合液中24小时。然后用水

  2.盐酸一草酸按离析法盐酸一草酸钱离析法较缓和，适用
于叶肉组织、髓和其他薄壁细胞的离析。其方法是先把材料切成小
块，放于3:1的70%酒精和浓盐酸混合液中24小时。然后用水
洗净，放入0.5%草酸按水溶液中，时间视材料性质而定，每隔1-
2日检查一次，直至材料分离。离析后用水冲去草酸按，把材料保
存于70%的酒精中备用。

  3.氨水离析法适用于观察分生组织细胞的立体形状。将刚
萌发种子的胚根沿纵向切成薄片，在浓氨水中浸24小时后水洗。
染色后取少许材料置于载玻片上，盖上盖玻片，用解剖针轻敲使细
胞分离。在光学显微镜下便可观察到细胞的立体形状。

  4.酒精一盐酸离析法此法可用于幼嫩材料的离析，如根
尖、茎尖和幼叶等。用等量的95%酒精和浓盐酸混合，在50℃条件
下离析约24小时。如果材料已呈半透明状态，表明已离析完全，用
水洗净盐酸后即可用70%的酒精保存备用。

用离析材料制作永久制片过程

  离析后的材料只需轻轻震动，细胞彼此即分离开。这些材料可
制成临时装片进行观察，也可制成永久制片保存。永久制片的制作
过程因材料和观察目的不同而异。

下面以裸子植物(松树)木质部离析材料为例，介绍管胞装片的制作过程。

  1.将离析后的材料充分水洗，以彻底除去离析剂(铬酸和硝
酸)。为防止材料掉失，可用离心机收集离析材料(管胞)。
  2.洗净后的材料用1%的番红水溶液染色12^24小时。然后
用水洗去残余染料，并用离心机收集材料。
  3.脱水仍用离心机操作。依次用30%,50%.70%.85%.
95%,100%(两次)的酒精脱水，每次5-10分钟。
  4.透明分别用酒精二甲苯混合液、纯二甲苯(二次)透明，
每级5一10分钟。
  5.封片取清洁干燥的载玻片和盖玻片，将透明后的材料少
许放到载玻片上，滴树胶，加盖玻片即成。

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