荧光显微镜在生物学的应用

荧光显微镜在生物学的应用-怎么选择光学仪器

免疫荧光显微镜

免疫荧光显微术是将光学显微镜加以改造以对荧光化合物(fluores-
cent compound)所放出的光进行观察。荧光化合物是对某一波长的
光[激发波长(excitation wavelength)可以吸收，

并发出较长波长[发
射波长(emission wavelength)]的光。在荧光显微术中最常用的化合
物是罗丹明(rhodamine)发射红光;荧光素(fluorescein)发射绿色光。
首先，荧光化合物与抗体进行化学偶联，该抗体对观测对象细胞中的
特定蛋白质或大分子是特异的

。然后将荧光标记的抗体
加到组织切片上，或可透光的细胞上，并用激发波长照射标本，在标
本中已经结合上抗体的结构即可见到。荧光显微术还可应用于活细
胞，它可对细胞和细胞内的结构的运动随着时间进行观察

共聚焦显微术
共聚焦扫描显微术是标准免疫荧光显微术的改进型，可得到全细胞
或较大样本更为清晰的映像。在标准免疫荧光显微术中，化合物发
射的荧光来自焦平面(plane of focus)上下两侧的分子，因而使映像
模糊不清，难以确定真实的三维分子排列。使用共聚焦扫描显微镜
时，只有处于焦平面的分子才发出荧光，这是由于使用了聚焦的激发
波长激光束(laser beam).激光束在标本的各个不同部分移动，并在
不同深度上透过样木得到一系列映像。然后这些映像经过计算机综
合处理，即可得到完整的三维映像。

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