光学显微镜物镜聚光能力小于数字孔径大的物镜

光学显微镜物镜聚光能力小于数字孔径大的物镜

  数值孔径（N.A.）小的物镜聚光能力小于数字孔径大的物镜。N.A.
对空间分辨率也很重要：N.A.大的透镜比N.A.小的透镜更能分辨标本中
的精细结构。放大倍数也很重要：高倍放大物镜（100 x ）的聚光能力
弱于60 x或40x 的物镜。

  因此用40 x或60 x，N.A.为1.4 的油镜可以获得最好的最明亮的图
像，因为这样镜头能收集绝大部分的光、很好的分辨结构、并能有效地
放大并传至检测器、以高对比度成像（lnoue 1986）。

  要获得最佳效果，还要正确选择盖玻片的厚度，而且观察荧光时，
要在盖玻片的正下面，成像时则需标本固定介质的折射率与浸润镜头的
介质的折射率（常为1.5 ）相匹配。要对含有水的标本成像，则需要一
种特殊的水浸润镜头

  倒置显微镜的光路。光线从光源（如水银灯或氙灯）发出后，特定
波长的光线通过一个激发光滤光器，以激发特定的荧光染料。光线然后
到达二色光束分裂器，使得短波长的光反射至标本。波长较长的发射光
却通过光束分裂器。

  发射光滤光器将所有来自激发光滤光器的光线减弱，却能让标本发
射的任何荧光有效地通过。发射光的波长总是比激发光的波长大。插图
：DAPI波光器的透光曲线。

  点线表示激发光带通滤光器，实线表示光束分裂器，短条线表示发
射光带通滤光器

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