普通荧光显微镜分辨率常识

传统的荧光显微技术

  在荧光显微技术中，光谱由特定波长的光产生。荧光显微镜可使未
混有激发光的发射光的透射最大化，激发光的强度比发射光大得多。传
统的荧光显微镜开始只用于固定的细胞。

  检测荧光在活细胞内分布的照相技术由于感光乳剂对低水平光的敏
感性低而严重受限，这样，长时间曝光导致暂时清晰度较低，并可能造
成对细胞的光力学损伤和细胞运动伪迹。将荧光显微技术与视频图像处
理系统结合，克服了这些困难，扩展了用荧光技术探测活细胞的使用范
围。由于视频的速度和敏感性较高，可以实时观测并记录荧光强度和分
布的快速变化。

  传统荧光显微镜技术有一个缺点是产生视野深度很小的图像。由于光
学显微镜的分辨度是0.2 μm ，在2~3 um厚的焦距范围内添加这么小的
图像会使结构显得模糊。对于超过10μm 厚的样品，焦距以外来的光也
能使图像衰变，在所研究的结构周围产生一个弥散的晕轮。焦距外荧光
降低了对比度和清晰度。结合使用差异干涉相差显微技术和超低光水平
敏感视频检测仪使人们能较长时间在活细胞内观测荧光，而光力学损伤
和染料漂白都达到最低，且能提高清晰度。但是，去除焦距外荧光的最
好途径是用共聚焦显微技术。

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