荧光显微镜的光学设计原理及仪器结构特点

光学系统

  在落射式荧光显微镜中，物镜具有激发样品和收集荧光的双重功能，
因此要求物镜必须保证各波长范围内的透光性能。荧光效率与所用物镜
数值孔径N.A的4次方成正比，所以还应配备高N.A的油浸或水浸物镜，

以满足采集样品精细结构图像的需要。目镜的放大倍数对荧光亮度的
影响较为明显，荧光亮度与目镜放大倍数的2次方成反比。

落射式荧光显微镜的光路是从光源发射出的激发光通过激发滤片，选择
出合适的激发光到达二色分光镜，较短波长的激发光被其反射下来，

经物镜后激发样品:样品产生的荧光再经物镜到达二色分光镜，较长波长
的荧光透射过去，阻断滤片进一步滤除掉其中的短波长的光线，使一定
波长范围的荧光到达目镜供观察。

落射式荧光显微镜主要由照明系统、荧光滤片系统(激发滤片、阻断滤片、
二色分光镜)、光学系统(物镜、目镜)等结构组成。这种显微镜的进步性
体现在以下几个方面:

首先，构造的新型物镜允许更多的失真较少的激发光通过，并且还能收集
更多的发射荧光;其次，先进滤片系统的发展阻止了散射的激发波长到达目镜;

另外，还有一种滤片系统使研究者可以同时采集来自不同结构的信息，每种
结构带有不同的荧光团，具有截然不同的吸收和发射光谱。

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