高图像质量光学显微镜常识

高图像质量光学显微镜常识-光源到物镜二维图像

  当透射光线到达检测器时，彩色的电子束分裂器将激发光线反射
至样本。光源到物镜的光路和物镜到检测孔的光路本质上是一样的。

  因此。照明和检测孔都聚焦在样本上的照明点，这就是为什么把
该系统叫做“共焦”。由于被检测的信号通常十分微弱，使用的检测
器是一个光电倍增管。

  共聚焦系统中，一次只能观察一个点。因此，为了形成一个图像。

  那个点必须被扫描。

  同时记录测试到的强度。这通常依靠两个镜子扫描光束来实现，
叫做共焦激光扫描显微镜方法（confoeal laser seanning mieroseopy，
CLSM）。

  测试到的强度被记录并且在一个主机上显示出来，扫描系统也是
靠主机驱动的。获得的所有沿轴向的薄区域很大程度上已经没有了非
聚焦光线，这种效果叫做光学断层，然后，沿Z 轴重复扫描X 一Y 平
面就可以获得可供分析的三维图像。

  单个平面在所有Z 区域的投影都会得到一个二维图像，与常规显
微术不同的是，CLSM得到的仅是聚焦区域的信息，因此较大的场深是
通过叠加非常薄的聚焦区域得到的。

  要采集到最好的图像，必须结合以下三个因索：激光强度、共聚
焦孔的尺寸和放大器的增益。增加任何一个因素的参数都会使图像更
明亮，但是会损害图像质量。如分辨率降低、信噪比降低或者使图像
漂白。

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