高效液相色谱仪和手性色谱柱的应用

　　高效液相色谱法

　　色谱法具有许多明显的优势，可以在各种条件下获得一对手性化合物，可以满足分离和测量的要求。它可以进行简单快速的定性和定量分析，也可以进行制备规模的分离和微量测量。

　　色谱法已成为最有用的光学分割方法。这些方法包括高效的液相色谱法.气相色谱法.薄层色谱法.超临色谱法.毛细管电泳和逆流色谱-离心分配色谱法。其中，高效液相色谱法不会因高温而改变溶质结构，失去生物活性，柱的容量高，可以发展成实验室和工业规模来分离映射系统的制备。

　　根据其原理，液相色谱法可分为以下三种类型

　　(1)手性衍生法

　　优点:分离条件比较简单，只需要普通的HPLC色谱分离条件可以提高检测(紫外或荧光)的灵敏度。

　　缺点：需要高纯度的衍生试剂，每对映体的衍生速率不同。

　　(2)手性流动相法

　　优点：柱前不需要衍生，对色谱柱填料没有特殊要求。

　　缺点：添加剂选择不当会干扰溶质的检测，可拆分化合物有限。

　　(3)手性固定相法

　　优点：制备方便，适用于各种化合物的分割。

　　缺点：目前还没有广谱色谱固定相，需要根据样品的结构选择合适的手性柱。

　　结论：手固定相法仍然是目前最具优势的光学异构体分割方法。到目前为止，这种方法已经分为几十种类型.在过去的100年里，成千上万种手性化合物的对映体超过了分离手性化合物对映异构体的总和。

　　综上所述，高效液相色谱仪和手性色谱柱广泛应用于手性分离领域。

　　这几年我们用的是液相和色谱柱，大大小小的问题估计也遇到了很多，

　　所以在使用液相色谱的过程中，如何处理各种问题？

　　不用担心，研创手性科技总结了一些解决方案，消除了你脑中的问号！

　　Part01：压力

　　1.常见的仪器现象

　　压力升高.降低或不稳定

　　原因分析

　　①仪表管道堵塞；

　　②泄漏.流动相抽空.溶剂管滤芯堵塞；

　　③系统中有气泡；

　　应对方法

　　①对从泵到检测器进行系统检查，确定堵塞部位；

　　②检查每个接口，检查流动相，超声清洗或更换溶剂管滤芯；

　　③使用前超声流动相，排气。

　　2.常见的色谱柱现象

　　柱头塌陷，反压上升，柱效下降

　　原因分析

　　①如果流速过大，会导致高柱压或柱压上升过快，尤其是使用高粘度溶剂(如IPA,EtOH）；

　　②流动相或样品溶液过滤不彻底，固体颗粒堵塞管道或柱头，会造成柱压过高；

　　③在柱头沉淀或强烈吸附样品中的成分，会导致柱压升高。

　　应对方法

　　①如果柱前使用粘度高的溶剂导致柱压升高，建议先用小流速更换以前的溶剂，待柱压降稳定后再进样检测；

　　②由于柱压问题导致柱头塌陷，无法恢复柱的性能，出现异常后可尝试反色谱柱进行实验；

　　③每个柱子都有特定的压力范围，请参考相应的色谱柱说明书；

　　④在更换流动相时，或将柱子刚刚连接到仪器时，逐渐增加流速；

　　⑤对流动相和样品溶液进行彻底过滤；

　　⑥样品预处理；

　　⑦仪器设置保护柱压力。

　　Part02：基线

　　1.色谱柱常见现象

　　基线漂移.基线噪音大

　　2.原因分析

　　①柱温变化；

　　②流动相混合不均匀；

　　③流通池污染或气泡；

　　④色谱柱平衡缓慢，特别是流动相组成发生较大变化；

　　⑤漏液；

　　⑥色谱柱污染。

　　3.应对方法

　　①控制实验室温度和柱温箱温度；

　　②使用HPLC溶剂、高纯盐及添加剂、流动相在使用前进行脱气；使用前轻轻摇动瓶子，使流动相均匀；

　　③使用前清洗流通池、流动相脱气；

　　④先用中等强度的溶剂冲洗柱子；

　　⑤注意压力，排除漏液的地方；

　　⑥用强洗脱溶剂(在柱使用范围内)定期冲洗柱子。

　　Part03：峰型

　　一.峰峰的常见现象

　　1.原因分析

　　①峰前沿是由柱温引起的；

　　②样品溶剂与流动不兼容；

　　③色谱柱前端滤网板堵塞；

　　④柱效降低；

　　⑤柱头塌陷。

　　2.应对方法

　　①有时提高温度可以消除前沿；

　　②用流动相溶解增加流动相极性或样品；

　　③更换筛板。如果前延峰很快再次出现，注意检查颗粒物(样品、流动相、泵、进样阀)的来源

　　④建议使用保护柱冲洗色谱柱或更换色谱柱；

　　⑤更换色谱柱。

　　二.峰峰型的常见现象

　　1.原因分析

　　①样品超载；

　　②杂质峰干扰；

　　③硅羟基作用；

　　④洗脱强度不够；

　　⑤柱外体积或柱外体积过大；

　　⑥柱效降低；

　　⑦柱头塌陷

　　2.应对方法

　　①降低样品采样量或稀释样品浓度；

　　②纯化样品或调整流量比例，使杂质不干扰主峰；

　　③硅羟基作用；

　　④在柱可用溶剂范围内增加洗脱强度；

　　⑤减少连接点间隙，尽量选择细管；

　　⑥建议使用保护柱冲洗色谱柱或更换色谱柱；

　　⑦更换色谱柱。

　　三.肩峰是峰型常见现象

　　1.原因分析

　　①色谱柱或保护柱入口污染；

　　②样品溶剂与流动不兼容；

　　③干扰峰；

　　④色谱柱损坏。

　　2.应对方法

　　①用强溶剂清洗色谱柱或更换色谱柱，必要时可反冲，更换保护柱；

　　②用流动相稀释样品；

　　③可能是样品中存在的物质与目标对象没有分离，需要调整方法（调整流动阶段或更换色谱柱）来改变选择性，可能是通过空白溶液引入系统的污染物；

　　④更换色谱柱。

　　Part04：误进溶剂

　　1.常见现象

　　柱压剧增，分离突然变差

　　2.原因分析

　　①涂敷型产品（Y1-Y5)如果导入错误的溶剂(如二氯甲烷).四氢呋喃.乙酸乙酯.甲苯等)，立即破坏柱子；

　　②正相手性柱和常用流动相的保存溶液含有大比例的正己烷，而正己烷和甲醇.乙腈.水的互溶性很差，如果没有适当的溶剂置换，柱压也可能被破坏，因为柱子中原有的溶剂不溶于溶剂。

　　3.应对方法

　　①溶剂一旦误用，恢复柱子性能的可能性很低；

　　②立即停止泵，取下立柱，先用合适的溶剂(如乙醇)更换仪器前的溶剂，然后用立柱低速冲洗(至少20倍立柱体积)更换立柱中的误溶剂。

　　Part05：残留效应

　　1.常见现象

　　方法再现性差

　　2.原因分析

　　①在普通流动相中，残留物可长期稳定保留，“老化”柱子；

　　②实验后柱清洗不好。

　　3.应对方法

　　①出现问题后可以尝试冲洗后再使用；

　　②用“旧柱”在新柱上必须确认开发方法。