土壤样品悬浮液的直接显微镜检

土壤样品悬浮液的直接显微镜检-生物技术研究

  微生物种群的垢显微镜计数法土壤悬浮液的直接显微镜检是计数土
壤微生物的通用方法，土壤样品放在搅拌器中用如焦磷钠等试剂或洗涤
剂分散以破坏土壤团聚体，一定体积的悬浮液或放在1 厘米面积的显微
镜载玻片上或在已知尺寸大小的微生物计数室内用琼脂混合，琼脂硬固
后从计数室内取出放在显微镜载玻片上固定和染色，这个技术称作载玻
片技术，它提供了土壤颗粒释烯度和已知体积内的微生物数，此方法对
真菌计数特别有用，而对细菌计数则很困难，因为此法不易把细菌和土
壤颗粒区别开来，在水研究中使用很长时间的一种技术是用一种无色的
或黑色的聚多糖滤纸过滤土壤悬浮，然后将带有微生物的滤纸固定在载
玻片上并染色同，很强地吸附在固体基质上或包陷在团聚体中的生物是
不能进入土壤悬浮液的。

  染色技术的许多种，传统的孟加拉红和酚苯胺蓝染色已在很大程度
上为荧乐染色所取代，是最古老和最广泛地使用于细胞内DNA 的染色，
活细胞吸收少量的染料出现绿色；死细胞缺乏有功能的细胞质膜来吸收
大量的染料而显红色，然而，细胞的颜色也取决于染料的浓度、细胞壁
的性质，以及细胞中RNA 与DNA 的比值，明显区别活细胞与死细胞是困
难的，啶橙易吸附于土壤颗粒，对粘土染色不好，而对砂土染色则很有
用。
  荧光异硫氰酸盐吸附于蛋白质的基团，对细菌染色是极好的，但不
吸附所有的真菌，对于真菌来说，荧光染料——聚糖键，使用具荧光素
的二乙酸盐染色剂在理论上能区分活性与非活性菌丝，开始是不发荧光
染色剂的，吸附后被酯酸分裂成荧光素和己酸盐，游离的荧光菌丝是可
以发荧光的，当用于土壤制备物时，2%-10%的真菌菌丝能显示出荧光，
对幼嫩菌丝和菌丝末稍是很好的指示物。

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