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（superclean al-n）一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，hplc 法作为分析方法，检测水产品中孔雀石绿含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。二、实验目标物
孔雀石绿(cas:569-64-2)三、应用范围
本方法适用于鲜活水产品中孔雀石绿的检测的 hplc 检测及确证。四、参考标准
《gb/t 19857-2005 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》五、实验材料
nuanalytical superclean alumina-n 固相萃取柱 1000mg/3ml。六、实验方法1、 样品待测溶液制备
准确称取鱼肉样品 5.0 g 于 50 ml 离心管中，加入 10 ml 乙腈，超声波振荡提取 5 m
in，涡旋 1 min，4000r/min 离心 5 min，上清液转移至 50 ml 离心管中,残渣按照上述步骤
重复提取一次；合并两次提取液，用乙腈定容至 25 ml。2、活化
依次用 5 ml 乙腈活化3、上样和洗脱
在中性氧化铝固相萃取柱上加入 5 ml 待净化样品，收集流出液，然后用 4 ml 乙腈洗脱，合并收集流出液。4、重新溶解
流出液 45 ℃氮吹至近干，1 ml 乙腈定容，过 0.45 μm 滤膜，，供高效液相色谱测定。5、hplc 条件
色谱柱：superlu c18 (250×4.6mm, 5μm) 检测器：uv-vis@618 nm
流动相：a-乙腈 b-0.05 mol/l 乙酸铵缓冲溶液
流速：1.2 ml/min 进样体积: 50 μl
洗脱方式：梯度洗脱，洗脱程序如下：
时间/min
a/%
b/%
0.0
60
40
3.00
60
40
3.10
80
20
10.00
80
20
10.10
60
40
13.00
60
40
七、实验结果
1、0.5 mg/kg 鱼肉中孔雀石绿的添加回收结果
表 1 0.5 mg/kg 鱼肉中孔雀石绿的添加回收结果
名称
1
2
3
平均回收率（%）
rsd（%）
孔雀石绿
91.0
91.8
87.2
90.0
2.73
2、添加水平为 0.5 mg/kg 鱼肉中孔雀石绿检测的液相色谱图
图 1 添加水平为 0.5 mg/kg 鱼肉中孔雀石绿检测的液相色谱图
