生物物理工具荧光显微镜技术在细胞生物学应用

生物物理工具荧光显微镜技术在细胞生物学应用

  免疫荧光技术不仅可以获得定性和半定量的数据，而几也
是一种用来对细胞内某组分进行准确定量的很敏感的方法。无
论是从普通显微镜还是从共聚焦显微镜获得的荧光影像均可进
行数字化，然后在计算机上用图像分析软件处理。电子图像的
获得和分析是一个发展很快的领域，
。荧光显微镜技术具有较高灵敏性和专一性，因此是直接由
于研究活细胞内特定组分的极难得的生物物理工具。

抗体
免疫荧光法要求杭体必须能够在其他分子浓度很高时专一
地识别抗原分子。在多克隆抗血清中因含有多种不同的抗体，
它们可以与同一种抗原的多个抗原决定部位结合，因此，多克
隆抗血清虽然通常能很好地染色细胞，但是常常存在着高浓度
的非专一性抗体，因此会产生很强的背景。在多数情况下，抗
血清的简单滴定使伪信号减低到检测水平以下，从而消除这一
问题。抗血清的信号强度是直接地依赖于抗休的浓度并和抗休
的亲和常数有关:亲和性越强，有效稀释度越高。如果滴定不
足，在使用前，以固定的细胞预吸附抗血清，事实上，稀释数
倍后也可以获得较清楚的信号。除此之外另一个常用于多克隆
抗体的方法是抗体的免疫亲和纯化，也可以降低非专一性的染
色

  或者组织培养的上清液和腹水或者两者的混合物都可以使
用作为单克隆抗体，由于一般认为单一抗体是在没有竞争的情
况下与抗原结合的，因此总的说来使用单抗会增强信号强度，
虽然单克隆抗体通常能给出清晰的信号，但是某些单克隆抗体
在细胞染色时却不呈反应，这可能是由于下列事实所造成的，
即细胞中的特异性抗原决定簇被掩盖了或者是在细胞固定期间
被破坏之故。